用RNAi技术抑制肝癌细胞系SMMC-7721中DNMT3B对下游基因表达及细胞增殖的影响

摘要

目的：通过检测DNMT3B(DNA methyltransferase 3B，DANM3B)在不同肝癌细胞系中的表达水平和分析DNMT3B表达抑制所诱导的下游基冈的表达及癌细胞增殖凋亡情况，探讨DNMT3B和肝癌发生的关系。 方法：应用时荧光定量RT-PCR(Real-Time Fluorescent Ouantitative RT-PCR)方法分析止常肝细胞系、肝癌癌旁细胞系及7个月十癌癌细胞系中DNA甲基转移酶表达水平，同时分析肝癌细胞系SMMC--7721中DNMF3B表达抑制所诱导的发育和肿瘤发生相关的基冈SNCG，PDCD4和MBD3的表达，并以MSP(MethylatedSpecific PCR，MSP)方法检测SNCG基冈的启动子区甲基化状态。以流式细胞仪技术检测DNMT3B表达抑制对细胞增殖力及凋亡率的影响。 结果：DNMTI，DNMT3A，DNMT3B在所检测的肝癌细胞系中均存在高表达的趋势，尤其DNMT3B在肝癌细胞系中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞系，提示DNA甲基转移酶的高表达可能与肝癌发生有关。DNMT3B表达抑制诱导了与发育和肿瘤发生相关基冈SNCG、MBD3、PDCD4的表达，对其中的SNCG基冈的启动子区甲基化状态检测未发现明显的改变，表明DNMT3B表达抑制并未引起SMMC-7721细胞中SNCG基冈的启动子区去甲基化，其高表达可能存在其他的机制。DNMT3B表达抑制，肿瘤细胞的增殖力明显受到抑制，G<,0>-G<,1>期延长，凋亡率增高。 结论：DNMT3B在肝癌细胞中的高表达可能与肝癌的发生有关。DNMF3B表达抑制诱导了某些肿瘤相关基冈的表达，这种诱导并不完全依赖于 DNMF3B对CpG位点的甲基化作用。抑制DANMT3B表达可降低肝癌细胞系SMMC-7721的增殖能力。

目录

文摘

英文文摘

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前言

第一节 实时荧光定量RT-PCR技术检测肝癌细胞系中DNA甲基转移酶的表达

引言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4小结

第二节 DNMT3B的抑制对下游基因的影响

引言

1实验材料

2实验方法

3.结果

4小结

第三节 DNMT3B表达抑制对肿瘤细胞增殖力的影响

引言

1实验材料

2实验方法

3结果

4小结

第四节讨论

结语

结论

参考文献

致谢

作者简历

作者在读期间已或待发表的论文清单