转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达及调节的实验研究

摘要

[目的]1、探讨T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘(简称哮喘)中的失衡表达，及其表达量的比值与气道炎症的相关关系。2、探讨免疫抑制剂和免疫调节剂两种不同药物干预治疗，对在哮喘中表达失衡的转录因子T-bet/GATA-3的作用，寻求通过纠正T-bet/GATA-3表达失衡的方法来治疗哮喘的新型免疫疗法。 [方法]1、48只雄性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组、地塞米松组和咪喹莫特组，观察4组大鼠气道反应性；气道病理改变；用免疫组化及图像分析法检测肺组织中白细胞介素(IL)-4、IL-5、干扰素-γ(IFN-γ)、T-bet和GATA-3蛋白的表达；用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IFN-γ含量；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3mRNA的表达；用免疫印迹(Westernblot)法检测肺组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。2、从致敏SD大鼠脾脏中提取淋巴细胞，用免疫磁珠分离法分离获得CD4+T细胞，悬于RPMI-1640，接种于6孔板，每孔细胞终浓度为2×106个/ml，其中空白对照组(C组)：细胞终浓度为2×106个/ml，不加任何药物干预刺激；阳性对照组(A组)：细胞终浓度为2×106个/ml，OVA终浓度为100μg/ml；地塞米松干预组(D组)：细胞终浓度为2×106个/ml，OVA终浓度为100μg/ml，地塞米松终浓度为10-6M；咪喹莫特干预组(M组)细胞终浓度为2×106个/ml，OVA终浓度为100μg/ml，咪喹莫特终浓度为10μg/ml。于3，6，12，24小时4个时间点结束细胞培养，用ELISA法测定细胞上清液中细胞因子IL-4、IL-5和IFN-γ含量；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测CD4+T细胞中IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3mRNA的表达；用免疫印迹(Westernblot)法检测CD4+T细胞中T-bet和GATA-3蛋白的表达。 [结论]1、在支气管哮喘中，转录因子T-bet/GATA-3失衡表达，表现为转录因子T-bet基因和蛋白的低表达，GATA-3基因和蛋白的高表达；T-bet/GATA-3基因和蛋白表达量的比值低下，可客观反应哮喘的免疫失衡；且T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与气道炎症各指标呈直线相关，T-bet/GATA-3的失衡表达很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。2、地塞米松抑制转录因子T-bet基因和蛋白的表达，对转录因子GATA-3基因和蛋白的表达无影响，地塞米松并非是通过调节T-bet和GATA-3两转录因子的平衡来抑制气道炎症的。3、咪喹莫特不仅能够增加转录因子T-bet基因和蛋白的表达，同时能够抑制转录因子GATA-3基因和蛋白的表达，通过纠正T-bet/GATA-3表达失衡，调节Th1和Th2细胞亚群的平衡来抑制气道炎症，为哮喘治疗提供了新方法和新思路。4、地塞米松能够抑制CD4+T细胞转录因子T-bet基因和蛋白的表达，而对CD4+T细胞转录因子GATA-3基因和蛋白的表达无明显作用；咪喹莫特不仅能够增加CD4+T细胞转录因子T-bet基因和蛋白的表达，同时能够抑制CD4+T细胞转录因子GATA-3基因和蛋白的表达，体外实验提示地塞米松和咪喹莫特对转录因子T-bet/GATA-3不同的调节作用。

目录

缩略语中英文对照

引言

第一部分转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘大鼠中失衡表达和调节以及与气道炎症的相关性分析

实验材料

实验结果

讨论

第二部分转录因子T-bet/GATA-3在致敏大鼠脾CD4+T细胞中的失衡表达和调节

全文总结

参考文献

博士期间发表论文

致谢

综述和论著

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