Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2在糖尿病大鼠结肠组织中的改变

摘要

糖尿病胃肠功能紊乱是糖尿病(diabetesmellitus，DM)极为常见并发症之一，近年来糖尿病胃肠功能紊乱的研究热点主要集中于神经、胃肠激素以及血管病变上，但是糖尿病胃肠功能紊乱的发病机制目前仍未明确。 [目的]1.建立糖尿病大鼠模型，为探讨糖尿病性胃肠功能紊乱的发病机制提供载体。 2.探讨糖尿病大鼠结肠组织中Cajal间质细胞的分布及其超微结构的改变、Cajal间质细胞与c-kitmRNA表达的关系。 3.探讨糖尿病大鼠结肠组织中血红素氧合酶-2的改变。 4.探讨糖尿病大鼠结肠组织中Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2的共表达情况。 [方法]1.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法，按80mg/kg的剂量建立糖尿病大鼠模型；对照组注射等量的枸橼酸缓冲液，饲养6周后用炭墨推进试验测定大鼠胃肠推进率。 2.分别取两组大鼠近端和远端结肠组织，用透射电镜观察糖尿病组和对照组大鼠离体结肠组织中Cajal间质细胞的超微结构；免疫组化标记结肠组织Cajal间质细胞，计算机图像分析系统分析两组大鼠结肠组织中c-kit阳性细胞面积的变化；用RealTimePCR方法检测大鼠结肠组织中c-kitmRNA的表达情况。 3.分别取两组大鼠近端和远端结肠组织，免疫组化标记结肠组织血红氧合酶-2，计算机图像分析系统分析两组大鼠结肠组织中血红素氧合酶-2阳性细胞面积的变化；用RT-PCR和RealTimePCR方法检测大鼠结肠组织中血红素氧合酶-2mRNA的表达情况；用Westen-blot方法检测结肠组织中血红素氧合酶-2蛋白的表达情况。 4.双重免疫荧光同时标记Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2，观察Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2的共表达情况。 [结果]1.糖尿病大鼠血糖值比对照组显著升高(p＜0.05)；体重较对照组显著降低(p＜0.05)；胃肠推进率与对照组相比显著降低(p＜0.05)。2.正常大鼠结肠组织Cajal间质细胞有完整的基膜，丰富的沿细胞膜分布的小空泡，胞质内细胞器丰富，以线粒体最显著，异染色质较多，沿核膜分布；Cajal间质细胞之间、与神经元细胞、肌细胞之间形成很多的缝隙连接。糖尿病大鼠结肠组织中Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散；细胞器变性、减少；胞质广泛溶解；核周间隙增宽。 3.糖尿病组大鼠近端、远端结肠肌间神经丛c-kit阳性细胞面积较对照组显著减少(P＜0.05)；近端、远端结肠组织中c-kitmRNA的表达量较对照组显著减少(P＜0.05)。 4.糖尿病组大鼠近端、远端结肠肌间神经丛血红素氧合酶-2阳性细胞面积较对照组显著减少(P＜0.05)；近端、远端结肠组织中血红素氧合酶-2mRNA及其蛋白的表达量均较对照组显著减少(P＜0.05;P＜0.05)。 5.双重免疫荧光显示，对照组与糖尿病组大鼠结肠组织c-kit阳性细胞与血红素氧合酶-2阳性细胞在同一部位表达。 [结论]1.糖尿病大鼠较对照组大鼠体重减轻、胃肠推进率显著降低，说明6周糖尿病大鼠已经存在胃肠功能紊乱，以胃肠运动减慢为主。 2.正常大鼠结肠组织中Cajal间质细胞具有独特的超微结构，糖尿病大鼠结肠组织中Cajal间质细胞超微结构发生明显改变。 3.糖尿病大鼠近端、远端结肠组织肌间神经丛Cajal间质细胞数量较对照组明显减少，Cajal间质细胞数量减少可能与c-kit基因表达下调有关。 4.糖尿病大鼠近端、远端结肠组织中血红素氧合酶-2的分布、基因及其蛋白的表达均较对照组明显减少。 5.结肠组织Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2的变化、及其相关性可能是糖尿病胃肠功能紊乱的原因之一；Cajal间质细胞可能产生一氧化碳，并介导一氧化碳在胃肠运动中起重要的生理作用。

目录

前 言

第一部分: 糖尿病大鼠模型的建立

第二部分 :Cajal间质细胞在糖尿病大鼠 结肠组织中的改变

第三部分 :血红素氧合酶-2在糖尿病大鼠结肠组织中的改变

第四部分:Cajal间质细胞与血红素氧合酶-2在大鼠结肠组织中的共表达情况

小 结

附录

综述Cajal间质细胞与糖尿病胃轻瘫

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