SSH分离鉴定大鼠肾脏发育基因，Pea3基因在大鼠肾脏发育中的表达及意义

摘要

为了更好地探讨肾脏后期发育的分子机制，本研究利用生后发育这个时间窗口，从肾脏后期发育角度出发来筛选肾脏发育相关基因。 第一部分大鼠肾脏发育相关基因差减文库的构建及验证 目的：分离大鼠肾脏发育相关基因，构建双向差减文库并验证。 方法：分别以新生大鼠肾脏组织为检测组(tester)、生后21天肾脏为驱逐组(driver)，进行正向SSH；以生后21天肾脏为tester、新生大鼠肾脏组织为driver，进行反向SSH。经过总RNA的提取、mRNA的纯化、反转录、酶切、接头连接、2轮差减杂交和2轮PCR，获得正、反向差减杂交产物，将其克隆入质粒表达载体pGEM~-TEasy载体，转入XL2-BlueMRF'UitracompetentCells以扩增，克隆，测序，生物信息学分析，并随机挑选部分基因用RT-PCR技术验证其差异表达。 结论：RT-PCR所验证基因的表达趋势与差减文库表达谱趋势一致，提示所构建文库的可靠性和可信度。该差减文库为进一步研究肾脏发育提供了一个良好的平台。 第二部分Pea3基因在大鼠肾脏不同发育时期的表达及意义 目的：验证Pea3(Polyomavirusenhanceractivator3)基因的差异表达，并分析该基因在整个肾脏发育不同时期的时空表达规律。 方法：应用RT-PCR、WesternBlot、原位杂交技术检测不同发育时期大鼠肾脏组织Pea3基因mRNA和蛋白水平的表达情况。 结论：随着大鼠肾脏组织的不断成熟，Pea3基因表达逐渐下调，提示该基因可能参与肾脏的发生发育，其主要表达在输尿管芽分枝端和浓缩的后肾间充质上，提示该基因可能参与肾脏发育中上皮-基质之间的相互诱导发育过程。 本课题的特征和创新之处在于：(1)本文采用SSH技术首次对新生大鼠和生后21天大鼠肾脏发育相关基因表达谱特征进行了初步研究，并对差异表达基因进行生物信息学分析，获得了多个有意义的差异表达基因。(2)首次观察Pea3基因从胚胎到成年大鼠肾脏组织中的时空表达情况，探讨该基因在肾脏发育过程中可能介导了上皮-基质相互诱导的重要过程。

目录

前 言

第一部分大鼠肾脏发育相关基因差减文库的构建及验证

第二部分Pea3基因在大鼠肾脏不同发育时期的表达及意义

参考文献

致 谢

综述一 肾脏发育相关基因的研究进展

综述二 PEA3亚家族在发育和肿瘤浸润中的作用

在校期间发表的相关文章

论文独创性声明及论文使用授权声明