淡色库蚊抗药性相关新基因——NYD-MLC2克隆、序列分析及表达载体构建

摘要

[目的]鉴定淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中肌球蛋白轻链2基因(NYD-MLC2)的表达差异，获取NYD-MCL2cDNA全长序列，并构建NYD-MLC2原核和昆虫表达载体，为进一步研究奠定基础。 [方法]用荧光定量PCR法鉴定NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中的表达差异。用RACE法从抗性品系中扩增NYD-MLC2cDNA全长序列，对NYD-MLC2编码的蛋白进行生物信息学分析。用Blast软件在NCBI和SwissProt数据库中进行同源性比对，用Clustalw软件进行聚类分析，用EMBLpI/Mwtool计算等电点和分子量，Prot-Param分析NYD-MLC2基因编码的蛋白质的基本性质，Signal3.0软件进行信号肽分析，ProtScale软件进行疏水性分析，PSORTⅡ软件进行细胞定位分析，PatSearch软件进行基序分析，SMART软件进行蛋白质结构域分析，HNN软件分析二级结构，Tmpred软件进行跨膜区预测等。通过基因重组方法构建NYD-MLC2原核和昆虫表达载体。 [结果]荧光定量PCR结果显示，NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列，其中完整开读框序列为630bp，经推导编码210个氨基酸(GenBank/NCBIDQ140391，2005)，与多个物种的肌球蛋白轻链2基因比对，同源性大于25﹪。成功构建NYD-MLC2原核和昆虫表达载体。 [结论]NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达，提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关，值得进一步研究。

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综述 杀虫剂和帕金森病

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