亚溶解剂量补体C5b-9复合物诱导GMCs增生和ECM分泌及其NF-κB活化的作用

摘要

目的：探讨亚溶解剂量的补体C5b-9复合物(sublyticC5b-9，SC5b-9)体外能否刺激肾小球系膜细胞(glomerularmesangialcells，GMCs)上调增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen，PCNA)、细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)成份-纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleantin，α-SMA)的表达水平。此外，观察SC5b-9促进GMCs增生的同时，是否伴随细胞核转录因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)的活化。 方法：(1)体外纯化培养GMCs并经光镜、电镜、细胞收缩功能实验(10-7mol/L血管紧张素Ⅱ，ATII)及抗肌动蛋白(actin)抗体、抗结蛋白(desmin)抗体、抗细胞角蛋白(keratin)抗体染色鉴定。(2)采用确定的SC5b-9刺激培养的GMCs，实验设SC5b-9刺激组，另设抗胸腺细胞血清(anti-thymocyteserum，ATS)组、灭活人血清组、完全营养液组作为对照。用RT-PCR技术检测刺激40min时，PCNA、FNmRNA的表达，免疫组化检测实验40min、6h、18hPCNA、α-SMA和FN及细胞核内NF-κBp65表达情况，同时应用westernblot方法测定6h、18hFN蛋白表达，观察SC5b-9对GMCs增生和细胞外基质分泌的影响。(3)体外纯培养的GMCs用吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)处理，实验分为三组，即SC5b-9刺激组、PDTC+SC5b-9组和完全营养液组，用RT-PCR分析刺激GMCs40min后，PCNA、FNmRNA表达的变化。除此之外，还用免疫组化方法检查18hPCNA、α-SMA和FN及细胞核内NF-κBp65的表达，并用westernblot方法检测18h时FN蛋白表达，判断PDTC对由SC5b-9刺激介导的GMCs分泌ECM的抑制效应。 结果：(1)培养传代的GMCs在光学显微镜下呈梭形。电镜可见培养的GMCs胞浆中含有丰富的微丝结构。在培养的GMCs营养液中加入10-7mol/LATII，3min时即可见细胞发生收缩。免疫组化ABC法染色提示GMCs抗肌动蛋白(actin)抗体和抗结蛋白(desmin)抗体染色呈阳性，抗细胞角蛋白(keratin)抗体呈阴性。(2)SC5b-9作用后40min，PCNA和FNmRNA的表达水平明显上调，而实验40min时PCNA、α-SMA及NF-κBp65几乎未见表达，6h时有少量细胞核和胞浆着色，18h时PCNA、α-SMA及NF-κBp65表达显著高于ATS组、灭活人血清组、完全营养液组。实验40min和6h，FN各组均有基础性表达但无明显差异；18h时，SC5b-9刺激组与其它三组相比FN明显上调，与westernblot结果一致。(3)应用PDTC处理，PCNA和FNmRNA表达明显下调，18h免疫组化检测PCNA、α-SMA及细胞核内NF-κBp65表达降低，同时ECM中的FN分泌减少。 结论：(1)SC5b-9刺激GMCs后可使其增生和ECM分泌增加。(2)NF-κB活化与SC5b-9刺激后的GMCs增生及ECM的分泌有一定关系，而PDTC能通过抑制NF-κB的活化进而对SC5b-9刺激诱导的GMCs增生和ECM的分泌有一定的抑制效应。

目录

第一部分GMCs的培养、传代与鉴定

第二部分SC5b-9复合物刺激GMCs增生和ECM的分泌及其NF-κB的活化

第三部分PDTC对SC5b-9诱导GMCs增生和ECM分泌及其NF-κB活化的影响

附彩图

致谢

综述：亚溶解型补体C5b-9复合物（SC5b）与细胞内信号转导通路

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