类风湿关节炎基因表达谱研究及脂连素、脂连素受体基因在其发病中的意义

摘要

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是临床常见的慢性炎性自身免疫病，以多关节炎症、滑膜增生和骨侵蚀为基本特征，发病率在0.37～1％左右，致残率高，无论在发达国家还是发展中国家，都是沉重的社会和经济问题。近20年来，尽管对RA的基础和临床研究不断深入，但是寻找敏感可靠的诊断标记和新的治疗干预靶标仍然是临床面临的挑战性问题。 第一部分 类风湿关节炎基因表达谱研究 目的：运用基因芯片技术研究RA基因表达谱特征，从全基因组角度探讨RA相关致病基因，寻找新的诊断标记和治疗靶标。 方法：提取10例活动期RA患者和3例健康志愿者PBMC中总RNA，Illumina寡核苷酸基因芯片分析每个样本的48.000个基因变化。RT-PCR验证芯片结果。运用生物信息学技术，进一步分析差异表达基因意义。 结果：RA病人与健康对照者相比2倍上调基因122个，2倍下调基因29个。分子及生物功能分析显示上调表达的基因涉及细胞因子、趋化因子、细胞周期、细胞凋亡、蛋白翻译合成、代谢、转录调控、信号转导等基因种类。 结论：RA涉及多环节的病理过程，基因芯片技术发现了多个RA相关基因，深入研究这些基因在RA中的意义，有利于进一步理解RA分子机制，发现新的诊断标记和治疗靶标。 第二部分 脂联素及其受体在类风湿关节炎中的表达 目的：研究脂联素(Adiponectin，AD)及其受体1，2(Adiponectin receptor,AdipoR1，AdipoR2)基因在RA中的表达情况及其意义。 方法： 1.运用Real-time PCR分析RA、骨关节炎(Osteroarthritis，OA)、健康志愿者PBMC中，RA、OA滑膜组织中AD、AdipoR1、AdipoR2 mRNA表达情况。 2.运用Westem-blot及免疫组织化学分析RA、OA滑膜组织中AD、AdipoR1、AdipoR2蛋白表达情况。 3.运用ELISA测定RA、OA及健康志愿者血清中，RA、OA关节液中AD及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 4.以重组人AD因子刺激滑膜成纤维细胞，ELISA测定细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 5.以重组人AD因子Wistar大鼠关节腔注射，评价诱导关节炎症情况。 结果： 1.RA PBMC和滑膜组织中AdipoR1 mRNA表达明显高于OA及健康对照组(p<0.05)。AdipoR2 mRNA在RA和对照组的PBMC及滑膜组织中表达无明显差异。ADmRNA在各组PBMC中未能检测到表达，但RA滑膜组织表达中明显高于OA中(p<0.05)。 2.RA滑膜组织中AD和AdipoR1蛋白表达量明显高于OA组织中，AdipoR2在RA和OA组织中表达无明显差别。 3.RA、OA及健康志愿者血清中AD含量无明显差别，但是RA关节液中AD含量明显高于OA中(p<0.05)。关节液中AD含量和关节液IL-6水平及病程正相关。 4.以重组人AD因子刺激滑膜成纤维细胞24小时后，能诱导滑膜细胞选择性分泌IL-6和MCP-1。 5.以重组人AD因子大鼠关节腔注射后，关节腔及滑膜周围见炎性细胞浸润。 结论：AD具有促炎因子属性，AD和其受体AdipoR1基因在RA滑膜组织和关节液中高表达表明其参与了RA的病理过程。 研究意义及创新点： 1.通过基因芯片技术对RA病人PBMC进行全基因组分析，发现多个RA相关差异表达基因，为深入研究RA病理机制，寻找新的诊断标记和治疗干预靶标奠定了基础。 2.首先报道AD及其受体1基因在RA滑膜组织中高表达。 3.提出关节中脂肪组织和脂肪因子可能参与RA慢性炎症过程。

目录

声明

第一部分类风湿关节炎基因表达谱研究

引言

一、运用基因芯片技术研究类风湿关节炎外周血单个核细胞基因表达谱特征

二、RA相关基因生物信息学分析

三、讨论

参考文献

第二部分脂联素及其受体在类风湿关节炎中的表达

引言

一、PBMC和滑膜组织中脂联素及其受体mRNA表达

二、滑膜组织中脂联素及其受体蛋白表达情况

三、免疫组织化学分析滑膜组织中脂联素及其受体表达变化

四、ELISA测定血清及滑液中脂联素含量

五、重组人脂联素因子刺激滑膜成纤维细胞

六、重组人脂联素因子大鼠关节腔注射诱导关节炎模型

七、讨论

参考文献

综述

致谢