慢性淋巴细胞白血病的分子细胞遗传学研究

摘要

目的:探讨常规细胞遗传学(conventional cytogenetics，CC)分析、组合探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)技术对慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)患者染色体异常的检测价值，研究我国CLL患者染色体异常的特点，并分析染色体异常对CLL患者的预后价值及同其他预后指标，包括ZAP-70(70-kD zeta-associated protein)、CD38、血清乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，LDH)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)及淋巴细胞绝对计数的相关性。 方法:对61例CLL患者的骨髓或外周血标本，加入植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)刺激CLL白血病细胞的增殖及分裂，采用短期培养法培养72h制备染色体标本；采用常规R显带技术进行常规核型分析；同时应用一组探针(LSI D13S319、LSI p53和CEP17，LSI ATM，CEP 12，LSI MYB，LSI IGH Dual Color,Break ApartRearrangement Probe)进行FISH检测；采用多参数流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测CD5+CDl9+细胞CD38、ZAP-70的表达。 结果: 61例CLL患者中60例进行了CC检测，结果显示：11.7％存在异常，其中3例(5.0％)未见分裂象；61例患者的FISH检测结果显示：49例(80.3％)存在一种及一种以上细胞遗传学异常，34例(55.7％)显示存在del(13q14)异常，13例(21.3％)有del(17p13)异常，13例(21.3％)检出+12异常，13例(21.3％)显示存在涉及14q32的IgH重排，del(11q22)异常者7例(11.5％)，del(6q23)异常者3例(4.9％)。在50例CC结果核型正常的CLL患者中，应用组合探针FISH技术检测显示41例存在异常；7例CC异常核型的患者中，3例患者FISH技术未检测出异常；3例CC未见分裂象的CLL患者中，应用FISH技术检测发现2例存在单一的del(13q14)，1例存在del(13q14)伴+12异常。del(17p13)、del(11q22)异常多见于淋巴细胞绝对计≥50×10<'9>/L组、以及LDH、β2-MG、CD38高表达水平组，而FISH检测无染色体异常和单一del(13q14)异常多见于淋巴细胞绝对计数≤50×10<'9>/L组、以及LDH、β2-MG、CD38低表达水平组。伴有del(13q14)异常的患者存期明显长于无del(13q14)异常者[(166.83±13.85)个月vs(86.18±7.55)个月]，但两组之间无统计学差异(P=0.053)；伴有del(17p13)异常患者的生存期明显短于无del(17p13)异常患者[(65.11±13.45)个月vs(175.30±6.53)个月]，且差异具有统计学意义(P=0.000)；del(11q22)异常(P=0.479)、IgH重排(P=0.287)及del(6q23)(P=0.742)其差异均无统计学意义。 结论:由于CLL白血病细胞有丝分裂低下，虽加入刺激剂PHA，但是CC的染色体异常检出率仍很低；组合探针FISH技术则大大提高了异常染色体的检出率，del(13q14)异常是CLL最常见的染色体异常。单-del(13q14)异常患者多见于淋巴细胞绝对计数低于50×10<'9>/L、LDH及β2-MG表达水平正常组、以及CD38低表达组；而del(11q22)和del(17p13)异常多同预后较差的临床参数指标相关。伴有del(17p13)异常患者的总生存期(overall survival，OS)明显短于无del(17p13)异常患者。但由于观察样本量较少及随访时间较短，关于CLL染色体异常在我国的预后价值有待进一步的研究。

目录

论文说明：英文缩写表

声明

前言

第一部分慢性淋巴细胞白血病分子细胞遗传学特点

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

第二部分慢性淋巴细胞白血病细胞遗传学异常与其它预后因素相关性的研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、参考文献

攻读硕士期间发表的论文

致谢