对流行区日本血吸虫病诊断方法的评估以及建立估算流行率的血清学模型

摘要

日本血吸虫病仍是威胁我国人民身体健康的重要感染性疾病之一。根据2006年全国血吸虫病疫情通报，目前共有血吸虫病人671265人，其中晚期血吸虫病28939人，慢性血吸虫病642119人，急性血吸虫病207人。血吸虫病的防治面临严峻挑战。 在血吸虫病的防治中，流行率和感染程度的监测是主要考核指标，也是流行病学家评估疾病严重程度、考核防治效果、制定和调整防治策略、预测疾病发展趋势的依据，同时也是影响政府部门对疾病重视程度和资金投入决策的关键。然而，由于缺乏足够敏感和特异的血吸虫病诊断方法，获得准确的血吸虫病流行资料仍是目前血防工作的难题之一。 迄今为止，粪检仍是血吸虫病唯一的“确定性诊断”方法，但因该方法的群众依从性差，缺乏足够的敏感性，其实用性和可靠性受到很大挑战。尤其是自20世纪80年代初，抗血吸虫药物吡喹酮的大规模使用，导致血吸虫病流行区人群的感染度和流行率大幅下降，其敏感性进一步受到质疑。免疫学(以血清学方法为主)诊断方法因其简便易行、依从性好、灵敏度高等特点，在血吸虫病防治中的应用日益受到重视。目前，抗体检测在现场工作中被广泛采用。血吸虫病特异性抗体诊断通常以非疫区人群抗体水平为参考确定阳性判断值，如市售的ELISA检测抗体盒，以非疫区人群抗体水平“均值的2.1倍”或者“均值+2倍/3倍标准差”作为阳性判断值。但是由于抗体在机体内受免疫系统总体调节的影响，化疗后很长时间内仍在体内保持一定的水平，且其在体内的水平和转归具有个体差异性，导致“感染人群”与“感染治愈人群”及“非感染人群”的抗体水平分布具有一定程度的重叠，因此，在现场使用时，抗体检测存在难以区分现症与过去感染的困难。 为了探索合适的血吸虫病诊断方法，尤其希望对流行区血吸虫病流行率做出较为准确的估计，本研究对目前常用的血吸虫病血清学诊断方法进行分析评估，并评价了粪检模型用于流行率估计的可靠性，在此基础上构建了流行区人群特异性抗体水平分布的血清学模型，并将其用于血吸虫病流行区的流行率估计。 在本研究中，采用间接ELISA法检测抗体，得到定量的特异性抗体水平。而所有分析和模型构建数据均来自于标准化后的结果。 主要研究内容如下： 研究内容一：建立对间接ELISA结果进行标准化的方法通过间接ELISA法来定量检测大量样本的抗体水平时，存在板间结果难以比较的问题。由于我们研究的样本量大，一个现场人群的抗体检测至少历时一个月。因此，确定有效的对ELISA结果进行标准化的方法成为首要任务。由于ELISA实验的结果受时间、温度、酶活性、各步反应时间等诸多因素影响，使得不同实验人员、在不同时间所做实验的结果之间缺乏可比性。虽然已知数种ELISA结果的标准化方法，但尚无一种方法既简便实用又能有效地对大量样本的抗体水平进行标准化。 研究内容二：对ELISA法检测特异性抗体水平用于血吸虫病诊断的功效评估本研究的现场为江西省上饶市余干县瑞洪镇驾湖村和浙江省江山市何家山乡麻车村，前者(此后称江西现场)为日本血吸虫病流行现场，分别于2005年和2006年连续两年对该现场人群进行调查，后者(此后称浙江现场)于1995年达到血吸虫病传播阻断标准，近10年无新感染病人寺艮告，于2005年对该现场人群进行调查。采集人群(年龄5-65岁)的粪便和血清标本。在一周内分两天对研究对象各采集粪样1份，每份粪样制作3张kato片(称“2检6片”)。读片获得定量的粪检结果(每克虫卵数，EPG)；采用间接ELISA法检测血清中可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigen，SEA)特异的IgG和IgM水平，并使用I-STOD方法将所有的结果(OD值)转化成标准化的抗体浓度，为后续分析提供可靠的数据。 研究内容三：建立估算日本血吸虫病流行率的血清学模型对于血吸虫病的诊断，粪检方法的特异度高，但存在灵敏度低的缺陷，难以用于确切的流行率评估。虽然有不少基于血吸虫病粪检结果来估算流行率的数学模型见诸报道，但迄今为止，尚无一被实际应用于现场流行率的估算。其中，余金明等建立了基于日本血吸虫虫卵负二项分布的随机效应模型，并据此绘制了适于现场应用的袖珍图，旨在根据一次粪检观察到的人群血吸虫感染度和阳性率，从该袖珍图上估计人群“实际感染率”。我们利用所采集的现场资料，分析评估了该袖珍图的应用效果。结果发现，根据“1检2片”粪检结果，从该袖珍图得到人群的“实际感染率”几乎相当于“2检6片

目录

声明

第一部分建立间接ELISA结果标准化方法—I-STOD

引言

材料和方法

结果与分析

一、I-STOD方法的建立

二、I-STOD方法的评价与应用

讨论

第二部分对日本血吸虫病血清学诊断方法的评估

引言

材料和方法

结果与分析

讨论

第三部分建立估算日本血吸虫病流行率的血清学模型

引言

材料和方法

结果与分析

一、粪检结果及对随机效应模型袖珍图的评估

二、建立估算日本血吸虫病流行率的血清学模型

讨论

小结

参考文献

致谢

附录

综述：估计寄生虫病流行率的数学模型