改良手术法宫腔注射骨桥蛋白在小鼠胚泡着床过程中的作用探讨

摘要

研究目的:
　　(1)探讨宫腔注射OPN与小鼠胚泡着床的相关性，
　　(2)从子宫内膜肿瘤发生与发展的角度初步观察宫腔注射OPN的安全性，
　　(3)为提高ART(assisted reproductive technology,辅助生殖技术)中胚胎着床的成功率提供新技术。
　　研究方法:
　　(1)本课题采用以6周龄性成熟ICR（Institute of Cancer Research，美国癌症研究所）小鼠为研究对象，尝试对经典手术宫腔注射法进行简化、改良，采用不同于经典手术宫腔注射法的手术切口，即在小鼠耻骨联合上缘0.5cm，腹部正中线处做一长约1 em的手术切口，并以此进入腹腔暴露小鼠子宫，进行宫腔注射的改良;
　　(2)本课题通过OPN elisa（enzyme-linked immuno sorbent assay，酶联免疫吸附测定）试剂盒检测宫腔注射NS、OPN前后子宫体OPN含量变化，初步探讨改良手术宫腔注射法的注射效率;
　　(3)本课题建立小鼠自然受孕模型，根据干预措施的不同将ICR小鼠按照随机数表法随机分组为三组:空白组、NS组、OPN组(n=8);在受孕后第四天（记为D4）进行改良手术法宫腔注射NS、OPN，并于受孕后第八天(D8)处死并解剖小鼠，观察不同组小鼠的妊娠率及平均着床数，探讨OPN在小鼠胚泡着床中的作用;
　　(4)本课题通过免疫组化法检测宫腔注射后各组小鼠(n=8) D5子宫内膜E-cad（E-cadherin， E-钙粘蛋白）、VIM（vimentin，波形蛋白）表达水平变化，探讨宫腔注射OPN对子宫内膜细胞EMT（Epithelial-mesenchymal transition，上皮间质转换）的影响，从肿瘤的发生与发展角度初步探讨宫腔注射OPN的安全性。
　　研究结果:
　　(1)NS组OPN含量（9.91±5.75ng/L）较空白组（16.06±3.96ng/L）略微下降，但差异无统计学意义(P＞0.05); OPN组OPN含量（60.20±15.10ng/L）明显高于NS组及空白组，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
　　(2)NS组妊娠率及平均着床数(12.5％，0.3±0.7)均低于空白组(75.0％，9.1±5.9)、OPN组(62.5％，4.6±4.1)，差异具有统计学意义(p＜0.05); OPN组妊娠率及平均着床数低于空白组，但妊娠率的差异不具有统计学意义(p＞0.05)，平均着床数的差异具有统计学意义(p＜0.05);
　　(3)空白组、NS组、OPN组E-cad强阳性（+++）率表达均为75％，VIM弱阳性(+)表达率均为75％，三者之间差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　研究结论:
　　(1)通过改良手术宫腔注射法注射OPN可有效提高子宫OPN含量;
　　(2)通过改良手术宫腔注射法注射NS可显著降低小鼠妊娠率及着床数;
　　(3)宫腔注射OPN可以提高小鼠的妊娠率及胚泡着床数;
　　(4)官腔注射OPN对小鼠子宫内膜EMT无影响。

目录

声明

摘要

缩略词注释表

前言

文献综述

第一章 实验材料

1、动物准备

2、主要仪器与设备

3、主要试剂和耗材

第二章 实验方法

1、研究内容

2、技术路线

3、研究方法

第三章 实验结果与分析

1、改良手术宫腔注射法的注射效率

2、宫腔注射OPN对小鼠妊娠率及平均着床数的影响

3、宫腔注射OPN对小鼠子宫内膜细胞EMT的影响

第四章 讨论与结论

第五章 展望

参考文献

作者简介

攻读硕士学位期间参与的研究项目

攻读硕士学位期间获得的研究成果

致谢