shRNA干扰人增生前列腺平滑肌细胞PDE5A3基因表达治疗BPH/LUTs的研究

摘要

目的:
　　应用RNA干扰技术抑制PDE5A3基因在人增生前列腺平滑肌细胞中的表达，为临床应用RNA干扰技术治疗BPH/LUTs提供重要的理论依据。
　　方法:
　　制备4个靶向人PDE5A3基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒，转染人增生前列腺平滑肌细胞48h后，逆转录-聚合酶链反应(RT-pCR)及Western blot检测PDE5A3基因和cGMP的表达抑制效果。
　　结果:
　　将重组质粒转染人增生前列腺平滑肌细胞后，各组转染效率均超过90％，并成功诱导了RNA干扰。与空白对照和阴性对照组相比，4组shRNA均可在mRNA和蛋白水平降低PDE5A3的表达(P＜0.05)，其中siPDE5A3-2抑制效果最为明显:PDE5A3基因在空白对照、阴性对照和siPDE5A3-2组mRNA水平表达分别为1.05±0.06、0.98±0.06和0.41±0.02;在蛋白水平表达分别为0.49±0.04、0.46±0.04和0.18±0.00。cGMP在三组中蛋白水平表达分别为0.29±0.07、0.39±0.06和0.66±0.08。与对照组相比，siPDE5A3-2干扰人前列腺平滑肌细胞后PDE5A3和cGMP的表达均具有显著性差异(P＜0.05)。
　　结论:
　　RNA干扰能明显抑制人增生前列腺平滑肌细胞PDE5A3基因的表达，并增加cGMP蛋白的表达，本研究为进一步开展BPH/LUTs的基因治疗提供了理论基础。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 统计方法

1．4 质量控制

结果

2．1 人增生前列腺平滑肌细胞(HPSMC)细胞鉴定

2．2 PDE5A3基因shRNA慢病毒转染人增生前列腺平滑肌细胞

2．3 人增生前列腺平滑肌细胞中PDE5A3的基因及蛋白表达

2．4 siPDE5A3-2干扰人增生前列腺平滑肌细胞中PDE5A3基因和cGMP的表达

讨论

参考文献

综述 BPH／LUTs合并ED治疗的新靶点——PDE5

附录

博士研究生在读期间撰写论文及综述

致谢