Neuropilin-1诱导口腔鳞状细胞癌上皮间充质转化及其机制的研究

摘要

口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma，OSCC）是最常见的口腔恶性肿瘤，具有较强的局部浸润和转移能力，恶性程度往往较高。上皮细胞间充质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)在肿瘤的侵袭转移过程中发挥着重要的影响。神经纤毛素1(Neuropilin-1，NRP1)是一种多功能的跨膜糖蛋白，研究表明其表达程度与肿瘤的发生，生长和预后密切相关并且可能参与了某些肿瘤细胞EMT的进程。NRP1诱导口腔鳞状细胞癌发生EMT可能是其侵袭转移性较强的重要原因。
　　目的：⑴观察NRP1在口腔鳞癌中的表达，评价NRP1表达水平与口腔鳞癌临床病理以及预后的关系。⑵明确NRP1上调后口腔鳞癌细胞EMT的发生及生物学行为的改变。⑶探讨NRP-1诱导口腔鳞状细胞癌发生EMT的分子生物学机制。
　　方法：①应用免疫组织化学染色的方法检测60例口腔鳞状细胞癌标本及30例正常口腔粘膜组织标本中NRP1的表达强度、范围;统计分析NRP1表达水平与肿瘤临床病理以及预后的关系。②利用pcDNA3.1-NRP1真核表达质粒及pcDNA3.1空载质粒转染人口腔鳞癌细胞系CAL27，HN4及HN6，获得稳定高表达NRP1的细胞株（实验组）及相对低表达NRP1的细胞株（对照组）。观察质粒转染后两组细胞的表型的改变;应用RT-RCR和Western Blot方法分别检测两组细胞中NRP1以及上皮和间质标志物mRNA水平和蛋白水平的表达变化;应用划痕实验、Transwell侵袭实验、单克隆形成实验、耐药实验检测NRP1高表达后细胞生物学行为的改变。③应用RT-RCR和Western Blot方法分别检测两组细胞中NF-κB信号通路相关蛋白的变化。特异性抑制NF-κB信号通路活性，观察细胞的EMT进程能否被逆转。
　　结果：⑴免疫组织化学染色显示:60例口腔鳞状细胞癌标本中均检测出NRP1表达，而30例正常组织中仅6例检测出NRP1表达，显示NRP1在肿瘤组织中呈现高表达(p＜0.001);NRP1的表达与口腔鳞癌的淋巴结转移率密切相关(p＜0.05);生存分析表明NRP1高表达组总体生存率明显低于低表达组患者(p＜0.05)。⑵NRP1高表达诱导口腔鳞癌细胞系发生了明显的EMT，表现为细胞形态学的改变，上皮标志物E-cadherin和β-catenin表达下降，间质标志物vimentin和N-cadherin表达上升。细胞的迁移、侵袭、增殖能力以及耐药性显著增强，细胞发生EMT导致迁移侵袭性增强的同时获得了一定的肿瘤干细胞(cancer stemcell，CSC)样特性。⑶NF-κB信号通路在NRP1诱导的口腔鳞癌细胞EMT进程中呈现激活状态，特异性抑制NF-κB信号通路活性，可逆转NRP1高表达肿瘤细胞的EMT进程，并减弱其迁移、侵袭能力。
　　结论：本实验证明NRP1在口腔鳞状细胞癌组织中呈高表达，与肿瘤的淋巴结转移率及患者的生存率密切相关。NRP1可通过激活NF-κB信号通路诱导口腔鳞癌细胞发生EMT，增强其迁移侵袭能力的同时使其获得一定的CSC样特性。特异性抑制NF-κB信号通路活性，可逆转NRP1所诱导的口腔鳞癌细胞EMT进程，并减弱细胞的迁移、侵袭能力。

目录

声明

缩略词表

摘要

前言

第一部分 NRP1在口腔鳞状细胞癌中的表达及I临床意义

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第二部分 NRP1诱导口腔鳞癌细胞上皮间充质转化并改变其生物学行为

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

第三部分 NRP1诱导口腔鳞癌细胞上皮间充质转化的机制探究

1 材料和方法

2 结果

3．讨论

参考文献

文献综述 NRP1的功能及其在肿瘤治疗中研究的最新进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢