靶向DC的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21的研制及抗鼠眼角膜HSV-1感染的初步研究

摘要

目的:构建靶向树突状细胞(DC)的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21，针对抵抗鼠眼角膜单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的感染，探讨其是否能产生更强的免疫应答反应。
　　方法:通过经典基因克隆方法，首先经过限制性内切酶酶切，切除了原先PRSC-gD-IL-21（现存质粒）中gD基因，再通过酶切及连接反应使NLDC145与gD相连克隆至原来gD的克隆位点上，保留原先另一克隆位点IL-21的免疫佐剂的作用，构建靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-21，对其进行相关鉴定，并和壳聚糖(chitosan)包裹组成纳米HSV DNA疫苗，分别以靶向组pRSC-NLDC145·gD-IL-21+chitosan、非靶向组pRSC-gD-IL-21+chitosan、pRSC+chitosan和chitosan免疫小鼠3次，间隔2周，从而检测各疫苗对小鼠免疫应答的水平及对HSV-1眼部感染的免疫保护反应。
　　结果:靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-21，经基因测序、酶切鉴定后，序列完全正确;此重组质粒经蛋白印迹方法鉴定，其目的蛋白能在真核细胞内成功表达;且和纳米壳聚糖包裹形成包封率较高的靶向DNA疫苗组，与非靶向组比较，血清中HSV-1病毒中和抗体水平、小鼠泪液中特异性sIgA分泌水平以及CTL、NK细胞杀伤活性程度均明显增高，同时针对HSV-1眼部感染产生了更强的免疫保护反应。
　　结论:成功研制的靶向DC的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21，经小鼠眼表粘膜接种后诱导了更强的免疫应答保护反应，同时也间接证明了其目的抗原可最终靶向于DC，为今后该疫苗应用于治疗复发性单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)奠定了坚实的基础。

目录

声明

摘要

符号、变量、缩略词等本论文专用术语注释表

绪论

综述

第一部分 DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21 DNA的设计、构建与鉴定

1．1 材料与方法

1．1．1 材料

1．1．2 实验试剂

1．1．3 主要仪器

1．1．4 实验方法

1．2 结果

1．3 讨论

第二部分 鼠眼表粘膜接种靶向DC的纳米颗粒为载体的DNA疫苗pRSC—NLDC 145·gD-IL-21预防HSK的研究

2．1 材料与方法

2．1．1 材料

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 实验方法

2．2 结果

2．3 讨论

结论

参考文献

附录

作者简介

致谢