严重发热伴血小板减少综合征病毒对THP-1细胞TLRs表达的影响

摘要

目的： 研究严重发热伴血小板减少综合征病毒对THP-1细胞TLRs表达的影响。 方法： 1.以SFTSV JS14株为病毒株，用Vero细胞接种培养，每隔24h收集细胞培养上清并经定量PCR检测SFTSV病毒复制拷贝数，从而选取最佳时间点收获病毒液并用浓缩离心管浓缩病毒，-80℃保存备用。 2.将SFTSV病毒液进行10倍比稀释，每梯度200ul接种六孔板内生长良好的单层Vero细胞，每孔3ml甲基纤维素-DMEM覆盖物覆盖Vero细胞，9d后温和去除甲基纤维素-DMEM覆盖物，经预冷的4%甲醛固定细胞后，用结晶紫染色液染色，PBS洗脱3次，计算空斑数获得病毒滴度，单位：PFU/ml。 3.六孔板每孔1×106THP-1细胞，以MOI0.1接种SFTSV，实验分为2组，即SFTSV组和Control组，每隔24h、48h和72h收集细胞，用荧光定量PCR检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7和TLR9mRNA表达；同时，用流式细胞术检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7和TLR9蛋白表达。 结果： 1.Vero细胞培养SFTSV：（1）根据病毒繁殖生长情况，病毒在第4d后达复制高峰，故可在4d后收集病毒液。（2）SFSTV甲基纤维素-结晶紫空斑法形成的空斑清晰可数。 2.TLRs表达变化：（1）与Control组相比，SFTSV组THP-1细胞表面TLR2蛋白和mRNA表达升高，且均有统计学差异（P＜0.05），其中以48h时TLR2升高最明显。SFTSV组，48h与24h、72h相比有统计学差异（P＜0.05），24h和72h未见统计学差异。（2）TLR4升高水平高于TLR2。与Control组相比，SFTSV组THP-1细胞表面TLR4蛋白和mRNA表达升高，且均有统计学差异（P＜0.05），其中以48h时TLR4升高最明显。SFTSV组，48h与24h、72h相比有统计学差异（P＜0.05），24h和72h未见统计学差异。（3）与Control组相比，SFTSV组THP-1细胞内TLR3蛋白和mRNA24h均未见明显升高，48h和72h表达升高。SFTSV组，48h、72h和24h均有统计学差异（P＜0.05），但48h和72h未见统计学差异。（4）TLR7蛋白在THP-1细胞内表达较低。与Control组相比，SFTSV组TLR7蛋白和mRNA24h未见明显升高，48h和72h表达升高。SFTSV组，48h、72h和24h均有统计学（P＜0.05），但48h和72h未见统计学差异。（5）TLR9蛋白和mRNA均未见明显变化。 结论： 1.THP-1细胞表面TLR2和TLR4，细胞内TLR3和TLR7表达均有升高，其中以TLR4升高最明显。TLR9未见明显变化。

目录

第一个书签之前

中文摘要4

致 谢64

英文缩略词

Effects of severe fever with thrombocytopenia synd

Abstract

前 言

参考文献

第一部分 严重发热伴血小板减少综合征病毒的培养

以及病毒滴度检测方法的建立

引 言

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分 严重发热伴血小板减少综合征病毒对THP-1细胞TLRs表达的影响

引 言

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

攻读学位期间发表文章情况

致 谢