心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃黏膜的定位及心房钠尿肽对5-羟色胺分泌的影响

摘要

自从1981年deBold等首次从心房中提取出心房钠尿肽(ANP)以来，人们又相继发现了BNP、CNP、DNP、MNP和VNP，它们不仅存在于心脏，而且还分布于机体的许多部位。ANP在体内调节着许多生理机能，包括利尿、利钠、舒张血管、降低血压等作用。 目前，确定的ANP受体有三种即：NPR-A，NPR-B和NPR-C。ANP与靶细胞膜上的NPR-A结合后，通过激活膜结合型或颗粒型鸟苷酸环化酶(membrane-boundguanylatecyclase，mGC，或particulateguanylatecyclase，pGC)生成cGMP，cGMP能激活cGMP依赖蛋白激酶(cGMP-蛋白激酶，蛋白激酶G)，从而催化有关蛋白或有关酶类的丝/苏氨酸残基磷酸化产生生物学效应。NPR-A可以和ANP、BNP紧密结合，但是与CNP的结合力却很低，尽管ANP最初被认为是心房肌合成的激素，事实上ANP和NPR-A广泛的存在于心脏以外的其它组织中如：胃肠道、肺、胸腺，并认为它们可能作为局部调质或和以自分泌、旁分泌的方式调节胃肠道的功能。 我们的以往研究表明：NPR存在于大鼠胃黏膜的不同区域，并且它的分布密度在不同区域也有所不同，其分布的最大密度在胃窦。NPR的重要作用是抑制大鼠胃平滑肌的自发性收缩，这一作用同样在豚鼠和人的胃中都能观察到，然而，目前关于ANP合成细胞在大鼠胃黏膜的分布特点、超微结构定位、ANP合成细胞与其周围微血管分布密度的关系还不清楚。 胃黏膜的肠嗜铬细胞(enterochromaffincell，EC)是已经公认的分泌5-羟色胺(5-HT)的胃肠道内分泌细胞，然而，到目前为止关于ANP对5-HT分泌影响的研究尚未见报道，因此，本研究分为两个部分进行探讨，第一部分为心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃黏膜的定位研究：第二部分为心房钠尿肽对大鼠胃5-羟色胺分泌的影响的研究。 第一部分：心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃黏膜的定位研究本研究首先利用免疫组织化学技术，比较观察了ANP合成细胞在大鼠胃黏膜的阳性表达情况；利用包埋后免疫胶体金电镜技术，对胃内ANP合成细胞进行了超微结构定位研究；利用组织化学染色技术，观察了ANP合成细胞在大鼠胃内不同分区的分布特点；用扫描电镜技术及用单宁酸-氯化铁法对ANP合成细胞的分布密度和胃内的微血管分布密度的相关关系进行了研究。 主要实验结果如下：1.大鼠胃内ANP合成细胞的阳性表达利用免疫组织化学染色技术，观察了ANP合成细胞在大鼠胃内的阳性表达，结果显示：大鼠胃黏膜ANP合成细胞的阳性表达主要分布于胃黏膜的基底部.ANP合成细胞的形态呈多样性，如圆形、锥体形和烧瓶型等。 2.大鼠胃内ANP合成细胞的超微结构定位利用免疫胶体金电镜标记技术，对ANP合成细胞进行了标记，结果显示：免疫胶体金颗粒标记在胃黏膜的胃肠嗜铬细胞(enterochromaffincell，EC)的内分泌颗粒上；阴性对照用正常兔血清替代ANP抗体，结果EC细胞的内分泌颗粒上没有阳性表达。 3.大鼠胃黏膜ANP合成细胞在不同部位的分布特点及组织化学特性利用组织化学染色技术，观察了ANP合成细胞(EC细胞)的嗜铬特性和在大鼠胃内不同分区的分布特点，结果表明：EC细胞胞浆中呈现阳性表达(棕色颗粒说明其有嗜铬性)，用图象分析系统记数并用统计学分析表明，EC细胞在胃黏膜分布密度依次为：贲门区＞幽门区＞胃底区。 4.胃黏膜ANP合成细胞与其周围微血管的分布关系用单宁酸-氯化铁法和扫描电镜法，观察胃黏膜微血管的分布特点，微血管分布密度和EC细胞的关系，结果显示：在胃黏膜的不同切面上微血管在腺体间弯曲走行，在胃黏膜的基底部微血管的分布密度最大；胃贲门区黏膜的微血管密度与EC细胞的分布密度之间呈正相关(r=0.53p＜0.05n=18)，而幽门区黏膜微血管密度与EC细胞的分布密度之间无相关性(r=0.38p＞0.05n=18)，胃底区黏膜微血管密度与EC细胞的分布密度之间亦无相关性(r=-0.29p＞0.05n=18)。 以上结果提示：1.大鼠胃黏膜ANP合成细胞是EC细胞，EC细胞分布在胃黏膜的基底部。 2.EC细胞在胃黏膜分布密度具有部位差异，其分布密度的排列顺序是贲门区＞幽门区＞胃底区，并且ANP合成细胞具有嗜铬性。 3.在胃贲门区黏膜EC细胞分布密度高的区域微血管的分布密度也高，其分布密度与胃黏膜EC细胞分布密度呈正相关。 第二部分：心房钠尿肽对大鼠胃5-羟色胺分泌的影响目前已有研究证实，胃的5-HT也是由EC细胞合成分泌的，ANP和5-HT在同一细胞合成并在同一分泌颗粒中贮存和分泌，那么，二者的相互关系如何即ANP对5-HT的分泌有何影响?目前没有研究报道。因此，我们通过胃腔内直接注射ANP模拟了ANP腔分泌，通过舌下静脉注射ANP模拟了ANP内分泌，通过免疫组织化学技术、透射电镜技术和高压液相色谱技术观察了ANP刺激后，胃黏膜5-HT免疫反应阳性细胞数、内分泌颗粒的数密度和血清中5-HT含量的变化，诣在探讨ANP对胃黏膜EC细胞中5-HT分泌的影响。 主要实验结果如下：1.模拟ANP腔分泌对大鼠胃内5-HT分泌的影响在大鼠胃腔内直接注射ANP后，利用免疫组织化学技术、透射电镜超微结构的测量方法和高压液相色谱电化学检测方法观察ANP刺激后，胃内5-HT免疫反应阳性细胞数、胞浆中内分泌颗粒(SG)的数密度(Nv)及血清中5-HT含量。结果显示：与胃内注射生理盐水的对照组相比，胃内5-HT免疫反应阳性细胞、SG数密度显著增多(n=10p＜0.05)，但与对照组相比血清中的5-羟色胺含量却显著减少(n=10p＜0.05)。 2.模拟ANP内分泌对大鼠胃内5-HT分泌的影响在大鼠舌下静脉注射ANP后，胃内5-HT免疫反应阳性细胞数、SG的数密度及血清中5-HT含量与注射生理盐水的对照组相比，胃内5-HT免疫反应阳性细胞数、SG的数密度显著增多(n=10p＜0.05)，但血清中的5-HT含量显著减少(n=10p＜0.05)。 以上结果提示：在大鼠胃黏膜，ANP通过腔分泌或内分泌形式对EC细胞5-HT释放起明显的抑制作用，但对5-HT的合成可能没有影响。

目录

摘要

第一部分 心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃黏膜的定位研究

第二部分 心房钠尿肽对大鼠胃5-羟色胺分泌的影响

缩略语及符号

致谢

综述胃肠道心房利尿钠肽和5-羟色胺的研究现状

参考文献

本人简历及学习期间发表的论文