筛选与桃花粉育性基因连锁的分子标记及SCAR标记的转化

摘要

桃花粉可育/不育性状是衡量果实产量的一个重要指标，寻找与桃花粉可育/不育基因紧密连锁的分子标记，对开展桃的育种工作具有重要意义。本试验以重阳红×大久保杂交获得的32株F1代群体为试材，利用RAPD、AFLP技术对桃花粉可育/不育性状进行研究。主要研究结果如下： 以改良的CTAB法提取基因组DNA，经过检测，适合于RAPD、AFLP分析的需要。优化了桃适宜的RAPD反应体系：总反应体积为25μl，其中模板DNA40ng，MgC122.0mM，dNTP150μM，10×buffer2.5μl，TaqDNA聚合酶1U，Primer20pmol，余下的用ddH20补充。 采用BSA法，从F1代个体中随机选取5株样品DNA等量混合，构成花粉可育和不育基因池。利用180个RAPD引物，筛选出了两个与桃花粉育性基因连锁的RAPD标记——OPW03-900、OPW03-1300，经过JoinMap(R)3.0软件的分析，确定该标记与桃花粉育性基因的遗传连锁距离为6.46cM和15.02cM。 利用96对AFLP引物组合，筛选出16个引物组合在桃花粉育性基因池中表现多态性，通过Fl代分离群体验证，结果表明：绝大多数片段与花粉育性基因Ps/ps无连锁关系，只有引物组合E+AT/M+CTT扩增的片段(400bp)与目标性状发生分离。但该标记的重组率较高，为28.1％，与桃花粉育性基因Ps/ps的连锁距离为32.04cM。 把与桃花粉育性基因连锁的RAPD标记OPW03-900转化为SCAR标记SCW03-906，该序列已被Genebank收录，登录号为DQ659676。摸索了与桃花粉育性基因(Ps/ps)连锁SCAR标记的PCR退火温度，最终确定扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，68℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；72℃终延伸5min；4℃终止。通过后代群体及品种验证，表明已成功转化为与桃花粉育性基因连锁的SCAR标记，可以作为桃花粉育性基因的鉴定标记。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略表

前言

第一章材料与方法

第二章结果与分析

第三章讨论

第四章结论

致谢

参考文献

附表