低密度脂蛋白对冻融后猪精液生物学特性的研究

摘要

本研究的主要目的是评价蛋黄中低密度脂蛋白（Low density lipoprotein,LDL）对冻融后猪精子生物学特性的影响及LDL对冻融后猪精子DNA完整性及受精率的影响。以手握法采集的猪精液为试验材料，进行处理后，用0.25ml细管进行了冷冻试验。试验主要分3步进行：Ⅰ以三种不同的离心速度提取蛋黄中的低密度脂蛋白,分4个（7、8、9和10％ LDL）处理组,冻融后对精液品质进行生物学检测；Ⅱ不同浓度LDL添加后以单细胞凝胶电泳分析法，对冻融后的精液进行DNA完整性检测;Ⅲ不同浓度LDL添加后，冻融后的精液与成熟卵母细胞进行体外受精（IVF），检测其受精率。试验结果如下：
　　1、用三种不同的（10000转/min、8000转/min和12000转/min）离心速度提取蛋黄,然后在猪精液冷冻稀释液中添加不同浓度（7%、8%、9%、10%）LDL。以10000转/分离心速度离心的LDL，其冻融后猪精子的活率、顶体的完整率和质膜完整性显著高于8000转/分和12000转/分的（P<0.05），4个处理组中9%LDL处理组冻融后猪精子的活率、顶体完整率和质膜完整性显著高于其它三个处理组（P<0.05）。
　　2、冷冻稀释液中添加不同浓度（7%、8%、9%、10%）LDL对猪冻融后的精子进行了单细胞凝胶电泳分析，以检测冷冻对猪精子 DNA的损伤。添加浓度为9%的LDL，冻融后猪精子DNA损伤程度最小，浓度为7%、8%和10%的LDL，猪精子DNA损伤程度逐渐增大。4个处理组中9%LDL冻融后DNA完整率显著高于其它三个处理组（P<0.05）。
　　3、不同浓度（7%、8%、9%、10%）LDL对猪冻融后的精子进行了体外受精，以观测受精后的卵裂率。9% LDL（10000转/min）处理组冻融后猪精子体外受精率为46.35%，显著高于其它三个处理组（P<0.05）

目录

声明

第一章 前 言

1.1 冷冻对猪精子的损伤

1.1.1 猪精子冷冻损伤的机理

1.2 影响猪冷冻精液的因素

1.2．1 稀释液和冷冻保护剂

1.2．2 冷冻保护剂

1.2.3 精子的预处理

1.2.4 精浆的处理问题

1.2.5 精液冷冻过程

1.3 猪精子质量评估研究进展

1.3.1 精液品质评估的终定标准

1.3.2 传统的评估方法

1.3.3 新的精子评估方法

1.4 蛋黄LDL应用于精子冷冻保存的研究进展

1.4.1 蛋黄LDL生化特征概述

1.4.2 LDL在精子冷冻保存中的应用

1.5 本试验研究的目的和意义

第二章 材 料 与 方 法

2.1 实验材料

2.1.1 时间和地点

2.1.2 实验动物

2.1.3 主要药品

2.1.4 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1.材料与方法

2.2.2 实验程序

2.2.3 实验内容

2.2.4图象分析与统计分析

第三章 结果与分析

3.1 LDL对冻融猪精液质量参数的影响

3.1.3 12000转/分离心速度离心的LDL对冻融猪精液质量参数的影响

3.2 不同浓度冷冻保护剂对冻融猪精液DNA完整性的影响

3.3 10000转/分离心速度离心的LDL，不同浓度添加后对胚胎体外发育能力的影响

第四章 讨论

4.1 冻融过程中LDL代替卵黄保护精子的机理

4.2冷冻稀释液对冻融后精子DNA链完整性的影响

4.3 精液体外处理对精子体外受精后胚胎发育的影响

结论

致谢

参考文献