基于多室电泳分离系统筛选中药生物活性成分的方法

摘要

本文基于实验室前期开发的多室电泳分离系统，提出了一种快速筛选中药中生物活性成分的方法。以葡萄糖苷酶作为靶点酶进行实验，首先将中药萃取液与葡萄糖苷酶孵化，使活性成分与酶发生特异性结合,形成酶-活性成分复合物；然后将孵化物加入多室电泳分离系统的样品室中，施加一定电压，酶-活性成分复合物在电场作用下迁移到接收室中，与酶没有亲和作用的小分子停留在样品室中；最后使用有机溶剂使酶-活性成分复合物解离得到活性成分，进高效液相色谱-串联质谱分析。?-葡萄糖苷酶的迁移百分率是影响药物筛选结果的重要因素，因此对影响迁移百分率的因素缓冲溶液、膜的材料、施加的电压和电泳时间进行了优化。最终选择了67mM，pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，样品室和接收室间为醋酸纤维素膜（0.2μm），接收室和电极室间为聚醚砜超滤膜（10KD），施加电压为8V，电泳时间为15min。之后，选择已知?-葡萄糖苷酶抑制剂大黄素作为模板化合物验证开发的方法进行药物筛选的可行性，选择大黄素、丹参酮 I、丹参酮IIA和隐丹参酮验证该方法研究药物小分子间协同作用的的可行性。结果显示，当药物分子共同与葡萄糖苷酶孵化时其结合率不同于单独与?-葡萄糖苷酶孵化时，进一步对其做了酶抑制活性实验，按照筛选出来的相对摩尔比例实验时其酶抑制活性略高于各小分子单独实验的结果，表明该方法可以用于筛选对酶具有协同作用的小分子。之后，将该方法应用于筛选五味子萃取液中潜在的葡萄糖苷酶抑制剂，五味子醇甲、戈米辛D、五味子醇乙、巴豆酰戈米辛H、当归酰戈米辛H、当归酰戈米辛Q、巴豆酰戈米辛P被筛选出来。实验结果表明该方法可以快速的从中药萃取液中筛选出对靶蛋白具有亲和作用的活性成分，为从中药中快速筛选生物活性成分提供了一条新途径。更为重要的是，该方法在筛选具有协同作用的药物分子方面具有广阔的应用前景。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 药物筛选模型和技术

1.2 靶分子亲和技术

1.3 电泳技术

1.4α-葡萄糖苷酶及其抑制剂

第二章 实验部分

2.1 试剂和仪器

2.2 多室电泳分离系统装置

2.3 实验方法

2.4 五味子萃取液的制备

2.5α-葡萄糖苷酶迁移百分率条件优化

2.6 方法验证

2.7 五味子中潜在α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

第三章 结果与讨论部分

3.1?-葡萄糖苷酶迁移百分率条件优化

3.2 方法验证

3.3 从五味子中筛选潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂

第四章 结论

参考文献

致谢

附录