白藜芦醇对LPS诱导的HUVEC细胞增殖及管型形成的影响

摘要

目的:探讨白藜芦醇（resveratrol，Resv）对HUVEC细胞增殖和管型形成的影响及可能的作用机制。
　　方法:通过MTT法的检测，观察不同浓度的LPS对HUVEC细胞增殖产生的影响;通过划痕法观察LPS对HUVEC细胞迁移能力产生的影响;通过血管形成实验检测细胞的管型形成;通过亚硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的水平;RT-PCR法检测LPS对HUVEC细胞中CXCR4、VEGF、MMP-2、COX-2和iNOS的mRNA表达水平的影响，Western Blot法检测LPS对HUVEC细胞中p-ERK和p-JAK2的蛋白表达水平的影响。并且，检测Resv对LPS诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、管型形成、NO分泌的影响;以及Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中CXCR4、VEGF、MMP-2、COX-2和iNOS的mRNA表达水平，和p-ERK及p-JAK2的蛋白表达水平的影响。
　　结果:MTT结果表明，当LPS浓度为10 ng/ml时可促进HUVEC细胞增殖(P＜0.01);划痕实验结果表明，浓度为10 ng/ml的LPS可促进HUVEC细胞的迁移作用(P＜0.01);血管形成验结果表明，LPS可显著促进细胞的管型形成(P＜0.01);检测NO的亚硝酸还原酶法(Griess Reagent)实验结果显示，LPS可使细胞分泌的NO含量明显增多(P＜0.01); RT-PCR结果表明，LPS对HUVEC细胞中CXCR4、VEGF、MMP-2、COX-2和iNOS的mRNA表达有明显促进作用;Western Blot结果表明，LPS可以显著诱导HUVEC细胞内ERK和JAK2蛋白的磷酸化;同时，结果显示Resv可以对LPS诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、管型形成和NO的分泌产生明显的抑制作用，明显降低LPS诱导的HUVEC细胞中CXCR4、VEGF、MMP2、COX-2和iNOS的mRNA表达水平;抑制HUVEC细胞内ERK和JAK2蛋白的磷酸化。
　　结论:Resv可显著抑制LPS诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、管型形成和分泌NO的作用，其机制可能与下调趋化因子受体CXCR4、VEGF、MMP-2、COX-2和iNOS mRNA水平，抑制ERK及JAK2蛋白的磷酸化有关。

目录

声明

摘要

第一章 前言

2．1 实验材料

2．2 实验试剂

2．3 实验仪器

2．4 溶液配制

3．1 细胞培养

3．2 细胞活力检测

3．3 细胞计数

3．4 MTT法检测HUVEC细胞增殖

3．5 划痕法检测细胞迁移

3．6 血管形成实验检测细胞管型形成

3．7 亚硝酸还原酶法检测HUVEC细胞中一氧化氮(NO)的水平

3．8 RT-PCR法检测HUVEC细胞中mRNA表达

3．9 Western Blot法检HUVEC细胞中蛋白表达

3．10 统计学分析

第四章 结果

4．1 LPS对RUVEC细胞增殖的影响

4．2 Resv对HUVEC细胞增殖的影响

4．3 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞增殖的影响

4．4 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞迁移的影响

4．5 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞管型形成的影响

4．6 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞分泌NO的影响

4．7 Resv对LPS诱导的趋化因子受体CXCR4 mRNA表达的影响

4．8 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中VEGF mRNA表达的影响

4．9 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中MMP-2 mRNA表达的影响

4．10 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中COX-2 mRNA表达的影响

4．11 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中iNOS mRNA表达的影响

4．12 Resv对LPS诱导的HUVEC细胞中p-ERK、p-JAK2蛋白表达的影响

第五章 讨论

小结

第七章 结论

参考文献

致谢