红景天苷和榆黄蘑多糖对酒精性脂肪肝脂肪蓄积和炎性反应的作用及机制的研究

摘要

目的:本实验的目的是研究天然产物红景天苷和榆黄蘑多糖对酒精性脂肪肝脂肪蓄积和炎症的作用及机制。
　　方法:1.红景天苷体内实验部分使用C57BL/6小鼠建立酒精狂饮模型。通过HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏病理变化;检测血清中ALT、AST和IL-1β的含量;通过免疫组化实验观察小鼠肝脏中NLRP3和P2x7R的表达情况。体外实验部分使用LPS刺激Raw264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞，提取细胞总蛋白和RNA，通过蛋白印迹实验和qPCR检测IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA的变化。
　　2.榆黄蘑多糖体内实验分别建立急、慢性小鼠酒精性肝损伤模型，检测小鼠血清和肝脏中ALT、AST和TG的水平;通过HE染色、油红O染色和Masson染色观察小鼠肝脏病理变化;通过免疫组化实验检测小鼠肝脏内SIRT1、AMPKα、SREBP1和P2x7R蛋白的表达情况。体外实验部分用酒精刺激HepG2细胞，利用尼罗红染色观察细胞内脂肪含量的变化，并提取细胞总蛋白，对AMPKα和P-AMPKα的表达情况进行检测。
　　结果:1.体内实验中，红景天苷预处理能减轻酒精狂饮所致小鼠肝脏炎性反应相关蛋白P2x7R和NLRP3的表达，减少血清中转氨酶和促炎性细胞因子IL-1β的水平;体外实验中，红景天苷能下调LPS刺激Raw264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞导致的促炎性细胞因子IL-1β和TNF-αt的基因和蛋白水平。
　　2.榆黄蘑多糖在体内能减轻急、慢性酒精摄入引起的小鼠肝脏的炎症反应和脂肪蓄积，减少血清中ALT、AST和TG的含量，下调小鼠肝脏中脂肪代谢相关蛋白SREBP1以及炎症相关蛋白P2x7R的表达并增加SIRT1、AMPKα表达;在体外能够抑制酒精导致的HepG2细胞的脂肪蓄积并上调AMPKα和P-AMPKα的表达。
　　结论:红景天苷和榆黄蘑多糖能够明显减轻小鼠酒精性脂肪肝中的脂肪蓄积和炎性反应的发生。

目录

声明

摘要

英文缩略词表(Abbreviation)

前言

第一章 红景天苷对酒精性脂肪肝脂肪蓄积和炎症的作用及机制的研究

1．实验材料

1．1 实验药品和试剂

1．2 实验仪器

1．3 实验细胞

1．4 实验动物

2．实验方法

2．1 体内实验方法

2．2 体外实验

3．实验结果

3．1 红景天苷结构式和小鼠酒精狂饮模型示意图

3．2 组织染色实验与生理指标检测结果

3．3 免疫组化实验结果

3．4 红景天苷对促炎细胞因子的作用

3．5 红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞炎症的影响

第二章 榆黄蘑多糖对酒精性脂肪肝脂肪蓄积和炎症的改善作用及机制的研究

1．实验材料

1．1 实验药品和试剂

1．2 实验仪器

2．实验方法

2．1 体内实验

2．2 体外实验

3 实验结果

3．1 建立急性与慢性酒精性小鼠模型及榆黄蘑多糖处理

3．2 榆黄蘑多糖对小鼠急性酒精性肝损伤的作用

3．3 榆黄蘑多糖对小鼠急性酒精性肝脂肪蓄积的影响

3．4 榆黄蘑多糖对慢性酒精性小鼠肝损伤作用

3．5 榆黄蘑多糖对慢性酒精小鼠模型脂肪蓄积的影响

3．6 榆黄蘑多糖对酒精所致HepG2肝细胞脂肪蓄积的影响

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

博士在读期间获得成果

致谢