展示的白色念珠菌热休克蛋白90特异表位的杂合噬菌体抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用研究

摘要

白色念珠菌是寄生在健康宿主皮肤、粘膜的条件致病菌，它可以作为机会病原体在人体免疫能力下降和正常菌群失调时，引起浅层感染和系统感染。近年来，随着因治疗扩散性肿瘤以及免疫抑制剂的应用而引起的免疫缺陷患者日益增多，系统性白色念珠菌感染的发病率明显升高，它的危害性极大，死亡率非常高。白色念珠菌得不到控制的主要原因是缺乏有效的早期诊断、治疗和预防的方法。临床上依赖于传统的血培养的方法诊断该类疾病，但存在着检出率低，敏感性差和诊断过程时间长的问题。临床上采用多粘菌素B和吡唑类化学药物对患者进行治疗，但是耐药性的病例在不断增加。为了防止其复发，也延长了治疗的周期，但存在着明显的副作用。所以早期检测出白色念珠菌的感染，在患者进入免疫抑制状态前通过疫苗来增强机体免疫力具有重要意义。
　　本研究是利用展示有白色念珠菌热休克蛋白90(HSP90)特异表位(DEPAGE)的杂合噬菌体（以下简称SE-CA-HSP90）作为抗原进行抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用的研究，以期为真菌预防性疫苗的开发奠定基础。本实验包括以下内容:
　　1大量制备杂合噬菌体SE-CA-HSP90
　　在野生噬菌体的帮助下，将含有编码白色念珠菌HSP90特异表位(DEPAGE) DNA序列的pfd8H载体转化大肠杆菌TGl，转化pfd8H的大肠杆菌成功地分泌表达出展示有DEPAGE表位的杂合噬菌体，再用PEG6000回收和纯化培养液中的噬菌体粒子。杂合噬菌体样品经SDS-PAGE电泳后，在凝胶上可见有一条融合蛋白带，明显滞后于野生型噬菌体外壳蛋白带，采用敏感性较高的银染色方法染色，未见其它杂蛋白带，说明达到纯化要求。
　　2杂合噬菌体SE-CA-HSP90抗系统性白色念珠菌免疫保护研究
　　(1)建立系统性白色念珠菌感染模型，并筛选最佳感染剂量;
　　(2)以杂合噬菌体SE-CA-HSP90为抗原免疫C57BL/6小鼠，同时注射野生型噬菌体和缓冲液TE作为对照组。数周后尾静脉进行系统性白色念珠菌感染;
　　(3)不同时期进行下列指标的观察和检测:
　　(>)系统性白色念珠菌感染15天内动物死亡率的统计;
　　(>)感染15天后，将免疫动物的肾脏研磨成匀浆，在沙堡氏培养基中培养白色念珠菌，检测白色念珠菌菌落数的变化;
　　(>)制作组织病理切片，进行动物肾脏受损情况的对比。
　　实验结果表明免疫杂合噬菌体SE-CA-HSP90组，与免疫野生噬菌体组和注射TE组相比，对系统性白色念珠菌感染的抵抗力增加，表现在小鼠的存活率增加，寄居在肾中的白色念珠菌数量降低，组织病理学显示肾小管内的白色念珠菌数目显著少于其它组别。结果说明展示外源多肽的杂合噬菌体SE-CA-HSP90有可能发展成为有效的抗真菌疫苗。

目录

声明

摘要

英文缩写词

第一章 文献综述

1 白色念珠菌免疫学方面的研究进展

1．1 白色念珠菌的感染

1．2 白色念珠菌感染过程中体液免疫的作用

1．3 白色念珠菌感染过程中细胞免疫的作用

1．4 真菌疫苗

2 噬菌体展示技术的研究进展

2．1 丝状噬茵体的结构和生物学特性

2．2 噬菌体展示技术的原理

2．3 噬菌体展示的载体

2．4 噬菌体展示技术的应用

2．5 噬菌体展示技术的优势及特点

3 本论文相关的研究背景介绍

4 本论文研究的内容及意义

第二章 实验材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验方法

2．1 杂合噬菌体SE-CA-HSP90的制备与检测

2．2 系统性白色念珠菌感染小鼠模型的建立

2．3 杂合噬菌体SE-CA-HSP90对小鼠免疫保护作用研究

第三章 实验结果与分析

1 噬菌体展示白色念珠菌HSP90特异表位

2 系统性白色念珠菌感染小鼠模型的建立

3 杂合噬菌体对小鼠系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用

第四章 讨论

参考文献

致谢

作者简介