20-羟二十烷四稀酸(20-HETE)经NADPH氧化酶衍生的活性氧途径引起乳鼠心肌细胞钙超载效应

摘要

抑制细胞色素P-450(CYP450)ω-羟化酶作用20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic，20-HETE)产生降低，明显抑制心肌梗死面积。但是20-HETE对心肌细胞的作用还不清楚。因此，本研究旨在研究20-HETE对细胞内钙离子水平和活性氧( ROS)的影响。利用钙离子荧光探针Fluo-3染色，运用激光共聚焦显微镜检测20-HETE对培养大鼠乳鼠心肌细胞内钙离子浓度及钙瞬变的影响；ROS荧光探针DHE可穿透细胞，检测胞内ROS，Image ProPlus软件测定药物处理前后荧光强度的变化；运用光泽精化学发光法测定NADPH氧化酶活性。20-HETE（0.1umol/L）孵育，可以使胞内钙离子浓度由531±35.0增加到942±47.2，升高44％，且钙瞬变的幅度由2.8±0.24增加到4.2±0.27升高33％，20-HETE造成的细胞内钙离子超载的作用可明显被ROS清除剂tempol(100 u M)和NADPH氧化酶抑制剂加拿大麻素(apoeynin，1uM)阻断。20-HETE(O.1 u M)可致心肌细胞内超氧化物阴离子从31±1.2增加到40±1.7升高23％，同时使NADPH氧化酶活性由152972±11354.5增加到209932±17738.5增加27％。上述研究表明20-HETE引起心肌细胞钙超载：20-HETE激活NADPH氧化酶导致胞内ROS水平上调，造成心肌细胞钙超载。20-HETE可能与心肌缺血造成的心肌损伤有关。

目录

文摘

英文文摘

引言

材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 药品与试剂

1.3 实验仪器

2 实验方法

2.1 乳鼠心肌细胞的原代培养

2.2 细胞内钙离子浓度的测定

2.3 钙瞬变心肌细胞钙瞬变的测定

2.4 心肌细胞中ROS测定

2.5 NADPH氧化酶活性测定

3 统计学处理方法

结果

1 20-HETE对心肌细胞钙离子浓度的影响

2 20-HETE对心肌细胞钙瞬变的影响

3 ROS清除剂阻断20-HETE引起的心肌细胞钙离子浓度增加

4 ROS清除剂阻断20--HETE造成的心肌细胞钙瞬变幅度增大

5 20-HETE引起心肌细胞内ROS产生增多

6 NADPH氧化酶抑制剂阻断20-HETE诱导的细胞内ROS产生增

7 NADPH氧化酶抑制剂阻断20-HETE造成细胞内钙离子超载

8 NADPH氧化酶抑制剂阻断20-HETE对心肌细胞钙瞬变的影响

9 20-HETE激活心肌细胞内NADPH氧化酶

讨论

结论

创新点

参考文献

英文缩写

致谢