黄芪是一种传统的中药,近来发现其具有清除氧自由基、抗氧化、延缓衰老和细胞保护作用<'[7、8]>,该实验利用糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)诱导牛视网膜周细胞凋亡,对实验性牛视网膜周细胞凋亡的机制进行深入研究.并从凋亡的最关键酶Caspase入手,用黄芪和caspas-3抑制剂进行干预,研究其对实验性周细胞凋亡的保护作用和机制.[目的]研究AGEs对视网膜毛细血管周细胞的作用机制和特点;Caspase-3在周细胞凋亡中的作用和机制以及黄芪、Caspase-3抑制剂对AGES诱导周细胞凋亡的干预作用和机制.[方法]采用Ⅱ型胶原酶消化和120目滤网过滤,获得牛视网膜毛细血管碎片,用含20％胎牛血清的DMEM做培养基,结合细胞克隆分离除杂的方法,以获得较纯净的视网膜毛细血管周细胞.用α-平滑肌肌动蛋白抗体(α-isoform of smooth-muscle actin)、Ⅷ因子抗体、GFPA抗体进行细胞鉴定.取3~6代牛视网膜周细胞分组:(1)AGE组:共6个浓度组(10ug/ml、50ug/ml、100ug/ml 250ug/ml、500ug/ml、2mg/ml);(2)AGE对照组;(3)空白对照组;6个AGE组分别加入含不同浓度糖基化终产物的DMEM培养基、AGE对照组加入2mg/ml的BSA、空白对照组加入含10％胎牛血清的DMEM完全培养基,培育72小时后进行以下实验.此外2mg/ml AGE组细胞分别在12、24、36、48、72小时用TUNEL法检测凋亡细胞数.[结论](1)AGEs以时间、剂量依赖的方式促进周细胞的凋亡.(2)AGEs可以激活Caspase-3而加速周细胞凋亡的发生.(3)黄芪和Ac-DEVD-CHO均抑制AGEs诱导的周细胞凋亡.(4)黄芪和Ac-DEVD-CHO均能抑制周细胞内caspase-3活性.(5)120mg/ml黄芪对周细胞凋亡及caspase-3的抑制作用弱于Ac-DEVD-CHO(6)黄芪浓度高于120mg/ml时的作用还尚待进一步研究
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