以肝微粒体孵育的方式寻找抑制CYP2A6酶活性的天然药用植物

摘要

目的:尼古丁是香烟中重要的成分之一,由尼古丁对中枢神经的刺激诱导的尼古丁依赖是导致吸烟者成瘾及难于戒烟的主要原因。怎样帮助吸烟者更轻松的戒烟是近几年来戒烟的重点研究方向。尼古丁的血液浓度对于吸烟者的吸烟习惯有着重要的作用,尼古丁的血液浓度下降到一定域值时,便会引起吸烟的戒断症状,从而迫使吸烟者反复吸烟以维持体内的尼古丁浓度。近几年的研究发现尼古丁的体内主要代谢酶CYP2A6酶活性的缺失对于吸烟习惯的形成以及戒烟难易程度有着重要的影响,通过使用CYP2A6酶抑止剂(甲氧沙林)也可以模拟CYP2A6酶活性缺失的表现,减缓尼古丁的体内代谢速度,同时降低吸烟的欲望,但是甲氧沙林的副作用限制了它的临床运用。因此,我们希望通过筛选天然药物中具有抑制CYP2A6酶活性的物质,帮助吸烟者更轻松的戒烟。 方法:在本研究中,我们检测了240种中药萃取液,中药萃取液对于CYP2A6酶活性的作用采用肝微粒体孵育的方法评价,孵育液中的代谢产物采用HPLC方法检测。 结果:通过混和肝微粒体检测出来的香豆素最大代谢速率为:22.5±36.2 pmol/min/mg protein,米-曼常数(Km)值为:1.23±10.0μM。在本研究中发现:蛇床(Cnidium monnieri,Umbelliferae)、补骨脂种籽(Psomleae Semen,Leguminosae)、补骨脂果实(Psoraleacorylifolia,Leguminosae)、合欢(Albizzia Julibrissin,Leguminosae)、菊蒿(Tanacetum vulgate,Compositae)和白芷(Angelicae DahuricaeRadix,Umbelliferae)能够显著抑制CYP2A6酶活性,以香豆素的代谢产物7-羟化香豆素作为CYP2A6的酶活性指示剂时,半数抑制浓度(IC50)以及以100μg/ml测量其相对抑制程度分别为:0.7±O.1μg/mlm,0.8[％];1.2±0.2μg/ml,0.1[％];1.2±0.3μg/ml,0.2[％];5.5±0.4μg/ml,5.7[％];2.7±0.7μg/ml,0.8[％];4.0±0.6μg/ml,6.1[％],通过比较萃取剂在孵育系统中的预孵育和未经预孵育对于这些萃取剂的抑制效应,发现预孵育萃取剂能显著地增强萃取剂的抑制能力,结果说明这些中草药萃取剂抑制CYP2A6酶活性都是机制性抑制(Mechanism Based Inhibit)。 结论:在本研究中,我们首先测定了韩国人香豆素代谢的米-曼常数,这与以前的研究结果相似。而香豆素代谢的最大速率与目前已知 的白种人的代谢速率相差40倍，这一结果与日本人的研究结果相似，这再次证实了东亚人与白种人在香豆素的代谢速率上存在显著的种族差异。在本研究中我们发现了大量的能够显著抑制CYP2A6酶活性的天然药用植物，如蛇床子、补骨脂、菊蒿、白芷和合欢等。由于对尼古丁代谢的孵育体系构建不成功，不能够准确的反应这些抑制剂对酶活性的抑制作用，目前还无法评价这些萃取剂对尼古丁代谢的抑制效应。在后续的实验中，我们将努力构建一个完善的尼古丁孵育体系，以评价这些萃取剂对尼古丁代谢的作用。同时将构建尼古丁成瘾的动物模型，以评价这些天然药用植物对于辅助戒断尼古丁依赖的作用。

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

第二章实验材料、方法和步骤

第三章实验结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

尼古丁成瘾与遗传药理学研究的进展

致谢