HCMV感染对HEL细胞周期及复制允许因子Cdt1的影响

摘要

目的 研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染对HEL细胞周期及复制允许因子Cdtl的影响，探讨HCMV感染的发病机制。 方法 用HCMV感染同步化的人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblastic，HEL)细胞作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7天。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收获细胞，用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMV IE<,1>72蛋白，流式细胞术检测细胞周期，RT-PCR法检测Cdt1 mRNA的表达水平。 结果 1、模拟感染组未见细胞形态学改变，亦未出现HCMV IE<,1>72蛋白 阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆，膨胀，胞体及胞核巨大化，7天时可见所有细胞均发生病变；免疫细胞化学显示其 各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMV IE<,1>72蛋白。 2、模拟感染组在感染后12h时有65.7％的细胞处于G<,1>期，24h 时有43.8％的细胞处于G<,1>期。感染组在感染后12h时有70.4％的细 胞处于G<,1>期，24h时有69.9％的细胞处于G<,1>期。两组比较，均有显 著性差异(P<0.01)，感染组较模拟感染组明显增多。 3、模拟感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平最高,后逐渐下降,至72h时达最低水平,96h时又稍有回升。感染组在感染后12h时Cdtl mRNA表达水平较低,24h时稍有升高,48h达最高峰,48h后至72h急剧下降,96h时大致维持72h水平。两组相比,12h、24h和48h时Cdtl mRNA表达水平有显著性差异(P<0.05),12h和24h时感染组较模拟感染组明显降低,48h时感染组较模拟感染组明显升高。模拟感染组Cdtl mRNA表达水平的高峰出现在感染后12h,而感染组的高峰则出现在感染后48h,较之明显滞后。 结论 1、HCMV感染HEL细胞后在细胞核内进行复制、增殖。 2、HCMV感染影响了HEL细胞周期,使大部分细胞停滞在G<,1>期。 3、HCMV感染使HEL细胞复制允许因子Cdtl mRNA的表达水平迟滞。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

HCMV感染对宿主细胞周期调控因子的影响

致谢

攻读学位期间主要的研究成果及获奖情况