幽门螺杆菌CagA菌株对胃上皮细胞间隙连接影响的实验和临床研究

摘要

第一部分幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的实验研究 目的:观察体外实验中CagA<'+>H.pylori菌株对胃上皮细胞Cx32、Cx43表达、细胞增殖和细胞间隙连接超微结构的影响，及抗H.pylori药物干预后的变化，探讨CagA<'+>H.pylori菌株与胃上皮细胞间隙连接超微结构、Cx表达的关系。 方法:不同菌型H.pylori与BGC-823细胞按细菌/细胞比例20：1、100：1、500：1共培养24h、48h，及细菌/细胞比例100：1共培养16h后予抗H.pylori药物干预；对照组不加H.pylori或不加药物。用细胞免疫化学SABC法及计算机图像分析技术，检测细胞Cx32、Cx43表达变化；四唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况；原位固定与原位包埋法透射电镜及扫描电镜观察细胞间隙连接超微结构变化。 结论: (1)CagA<'+>H.pylori下调BGC一823细胞Cx43表达，随H.pylori密度增加和共培养时间延长，Cx43表达下调越明显；CagA-H.pylori对Cx43表达的影响不如CagA<'+>菌株明显。 (2)CagA<'+>H.pylori低密度时促进细胞增殖，高密度时抑制细胞增殖；CagA<'->H.pylori对细胞增殖无明显影响。提示H.pylori对胃上皮细胞的促增殖作用可能与其毒力因子CagA有关。 (3)CagA<'+> H.pylori菌株对细胞连接数目、连接长度的影响大于CagA<'->菌株，提示细胞间隙连接改变与CagA<'+> H.pylori菌株更密切。 (4)三联抗H.pylori药物干预可上调Cx43表达，抑制细胞增殖，改善H.pylori对细胞间隙连接的影响，促进细胞间隙连接形成。 第二部分幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的临床研究 目的:观察胃癌(GC)和癌前病变(PL)患者Cx32、Cx43表达和细胞间隙连接超微结构改变，及PL患者H.pylori根除后的变化，探讨其与H.pylori感染特别是CagA<'+> H.pylori感染的关系。 方法:选取70例GC、88例PL、33例慢性浅表性胃炎(CSG)患者，用组织免疫化学SABC法检测胃粘膜活检标本Cx32、Cx43表达，透射电镜观察细胞间隙连接超微结构改变。H.pylori感染者用PCR法行CagA基因检测。 结论: (1)GC和PL患者Cx32、Cx43表达阳性率和表达强度均降低，并与GC分化程度及PL类型有关。 (2)GC和PL患者胃上皮细胞间隙宽,细胞连接数目少，连接长度短。 (3)GC和PL患者Cx32、Cx43表达和胃上皮细胞间隙连接改变与H.pylori感染有关。 (4)GC患者CagA<'+> H.pylori感染者细胞间隙连接改变大于CagA<'-> H.pylori感染者，提示GC患者细胞间隙连接改变与CagA<'+> H.pylori感染更密切。 (5)H.pylori根除可上调PL患者Cx32、Cx43表达，缩小上皮细胞间隙，增加细胞连接长度。提示H.pylori根除可能促进细胞间隙连接形成，提高GJIC功能，延缓或阻止PL的进展，防止GC的发生。

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文摘

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论文说明：缩写词

声明

第一章幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的实验研究

1前言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验仪器

2.3方法

3结果

3.1 Cx32、Cx43表达变化

3.2细胞增殖变化

3.3细胞间隙连接超微结构改变

4讨论

4.1 H.pylori对胃上皮细胞Cx表达的影响

4.2 H.pylori对胃上皮细胞增殖的影响

4.3 H.pylori对细胞连接的影响

5结论

参考文献

第二章幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接影响的临床研究

1前言

2材料与方法

2.1研究对象

2.2研究方法与实验材料

2.3统计方法

3结果

3.1 CagA+H.pylori感染率

3.2 Cx32、Cx43表达情况

3.3细胞间隙连接超微结构改变

4 讨论

4.1 H.pylori感染、CagA+H.pylori感染与胃癌和癌前病变的关系

4.2胃癌和癌前病变患者Cx32、Cx43表达与细胞间隙连接改变

4.3 Cx32、Cx43表达及细胞间隙连接改变与CagA+H.pylori感染的关系

4.4抗H.pylori治疗对胃癌前病变Cx32、Cx43表达及细胞间隙连接的影响

4.5研究展望

5结论

参考文献

综术一 第三章幽门螺杆菌CagA与胃癌研究进展

综术二 第四章细胞间隙连接通讯与胃癌研究进展

致谢

攻读博士学位期间主要的研究成果