外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体透皮吸收效果及其对类风湿关节炎大鼠血清IFN-γ、IL-4影响的研究

摘要

本实验通过对外用甲氨喋呤(Methotrexate，MTX)柔性纳米脂质体透皮吸收效果和对RA大鼠血清γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)和白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)影响的研究，拟寻找一种治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方便、见效快而毒副作用小的MTX新剂型。 文中采用了2种方法。1．透皮扩散实验：采用陈鹰等人的方法<'[1]>，制备离体鼠皮，将其装于Franz扩散池，角质层面向供给室，真皮层面向接受池，接受液为生理盐水30ml，恒温水浴(37+1)℃，磁力搅拌器转速为100转/分钟。分别将0.5﹪甲氨喋呤散剂、0.25﹪和0.5﹪甲氨喋呤柔性纳米脂质体均匀涂布于各角质层表面，分别于2、4、6、8、10、12h于接受池取样5ml(同时补充同温度生理盐水5m1)，用0.45μn微孔滤膜过滤。滤液用生理盐水稀释至10ml，于306nm处测定吸光度，扣除生理盐水组后的吸光度代入标准曲线，再利用公式计算12h累积透过量和12h累积透过率。2．IFN-γ和IL-4水平测定：85只健康SD大鼠随机取10只设为正常组，余下的75只按照邓安梅等人方法<'[2]>造RA大鼠模型-Ⅱ型胶原诱导关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis，CIA)模型，它是目前国际公认的研究人类RA的模型，在临床、免疫病理反应等方面均极为相似。剔除5只造模不成功的，余下的70只大鼠随机分为4组：模型组(n=10)，0.5﹪MTXt(n=20)；0.25﹪MTX脂质体组(n=20)，0.5﹪MTX脂质体组(n=20)。正常组大鼠不予处理，其余各组于初次免疫7d后给药，于大鼠右后足分别涂抹蒸馏水、0.5﹪甲氨喋呤散剂、0．25﹪和O．5﹪甲氨喋呤柔性纳米脂质体，约2.0～4.0g/只(视关节大小而定)，每周一次。采用关节炎指数积分法评定关节症状，关节指数积分越高，关节症状越严重。给药后第45天采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清IFN-γ和IL-4水平。研究结果如下： 1.各组大鼠透皮吸收量比较：0.25﹪和0.5﹪MTX脂质体组12h累积透过量、12h累积透过率均高于0.5﹪MTX组外敷剂组，差异有显著性意义(均P<0.01)；0.25和0.5﹪MTX脂质体组累积透过量与12h累积透过率差异无显著性意义(P>0.05)。 2.各组大鼠关节炎指数比较各组大鼠关节炎指数积分21d前无明显区别，模型组随着时间延长，关节炎指数积分增加；0.5﹪MTX组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组于25d达高峰，但仍低于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组在25天、30天、35天、40天、45天发病程度明显轻于模型组(均P<0.05)。 3.各组大鼠血清IFN-γ表达水平比较模型组、0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显高于正常组(均P<0.01)。0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显低于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显低于0.5﹪MTX散剂组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组IFN-3,水平与0.5﹪MTX脂质体组相比，无显著差异(P>0.05)。 4.各组大鼠血清IL-4表达水平比较模型组、0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显低于正常组(均P<0.01)。 0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显高于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显高于0.5﹪MTX散剂组(P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组IL-4水平与0.5﹪MTX脂质体组相比，无显著差异(P>0.05)。 研究结论：外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能有效渗透皮肤组织；外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能明显降低RA大鼠关节炎指数；外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能下调大鼠血清IFN-γ水平及上调大鼠血清IL-4水平，且其作用明显优于普通外用甲氨喋呤制剂。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文采用的英文缩写词对照

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前言

第一章外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体透皮吸收效果的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第二章外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体对胶原诱导性关节炎大鼠血清IFN-γ和IL-4影响的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第三章结论

参考文献

综述 脂质体及促进药物透皮吸收的研究进展

致谢

在校期间科研成果及发表论文