去甲斑蝥素在大鼠体内与阿霉素合用时的药动学研究及相关毒理指标考察

摘要

一、目的 建立以高效液相色谱.质谱联用测定SD大鼠中去甲斑蝥素血浆药物浓度的方法；研究去甲斑蝥素在SD大鼠体内与阿霉素合用时的药代动力学特性及肝组织分布，并考察去甲斑蝥素与阿霉素合用对肝、肾生化指标和组织学的影响，为去甲斑蝥素在治疗肝癌时与阿霉素合用的合理性及安全性提供参考数据。 二、方法 1.实验分组及给药取健康SD大鼠16只，雌雄各半，随机分成两组，每组各8只。去甲斑蝥素与阿霉素联合组即实验组，以阿霉素注射剂(ADM)按6mg·kg-1剂量于尾静脉注射给药，每天一次，连续给药3天，在第4天按5mg·kg-1剂量于尾静脉注射去甲斑蝥素(NCTD)；去甲斑蝥素组即对照组，每只大鼠按5mg·kg-1剂量于尾静脉注射去甲斑蝥素(NCTD)。两组分别于注射NCTD后0.083、0.167、0.5、1、3、6、12、24h眼眶取血制备血浆。 另取SD大鼠50只，雌雄各半，随机分成NCTD组、ADM组和NCTD+ADM组，每组分为三个小组，每组各5只，取5只为空白对照组，于每天上午定时给药。NCTD组每只大鼠按去甲斑蝥素5mg·kg-1剂量于尾静脉注射给药，每天1次，连续注射7天。ADM组以阿霉素注射剂按6mg·kg-1剂量于尾静脉注射给药，每天1次，连续注射3天。NCTD+ADM组以阿霉素注射剂按6mg·kg-1剂量于尾静脉注射给药，每天1次，连续注射3天；去甲斑蝥素按5mg·kg-1剂量于尾静脉注射给药，每天1次，连续注射7天。动物以相同条件饲养，分别在第3天、第5天、第7天于末次给药后1h断尾取血并处死大鼠，取肝、肾组织放置在-20℃冰箱中保存待测，测定NCTD组和NCTD+ADM组大鼠肝脏中NCTD的药物浓度。取第3天处死组的大鼠在末次给药后1h断尾取血，以3000r.min-1离心，分离血清，做肝、肾生化指标检查，取血后立即处死并解剖各大鼠，取其肝脏及肾脏组织做组织学检查。 2.组织样品预处理精密吸取样品血浆或肝脏组织匀浆200μL，加入甲醇600μL，精密加入斑蝥素(49μg.ml-1)内标液20μL，混合均匀，涡旋震荡3min，离心(10000 r.min-1)10min，精密吸取上清液20μL进样。按色谱、质谱条件进行分析。记录测得的各样品的色谱图和去甲斑蝥素与内标(斑蝥素)的峰面积(As和Ai)。 3.生物样本测定方法HPLC-MS法测定SD大鼠血浆与肝脏组织中去甲斑蝥素的浓度。 4.血液生化指标检查用全自动生化仪测定血清中的谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)的含量。 5.病理组织学检查取肝脏、肾脏组织置于10％福尔马林溶液中固定，常规脱水、石蜡包埋、切片，苏木精.伊红(H.E)染色，在光学显微镜下观察各组动物肝脏及肾脏组织的形态学改变。 三、结果 1.生物样本测定血浆样品中的NCTD浓度在0.53-21.2μg.ml-l范围内线性关系良好，相关系数(R2=0.9995)，血浆样品室温放置及冻融稳定性均稳定，血浆的方法回收率在90％-110％范围内，样品日内、日间变异系数均小于10％。 2.药代动力学参数和肝组织分布NCTD组和NCTD+ADM组大鼠尾静脉注射NCTD后，其在体内快速分布，t1/2(α)分别为0.606h和0.584h，消除相对较快，t1/2(β)分别为5.13h和5.059h符合二室模型。NCTD+ADM组的分布速度常数(α)、分布相半衰期(t1/2(α))、中央室向周边室的转运速度常数(k12)与NCTD组比较有差异，去甲斑蝥素在与阿霉素合用后，对去甲斑蝥素在大鼠体内的消除相没有明显影响，只是改变了去甲斑螯素在体内分布相的转运速率，即去甲斑蝥素由中央室向周边室的转运速度加快，分布相半衰期减小。在多剂量连续给药的第3、5、7天时，NCTD组和NCTD+ADM组在肝脏中的NCTD浓度分别为26.288±0.3133，29.483±0.8314；33.423±0.3257，36.770±0.2332:34.162±0.2505，37.540±0.3543 lag.mL-1。 NCTD+ADM联合组在肝脏中的NCTD药物浓度明显高于NCTD单用组。 3.血液生化指标检查： 结果显示去甲斑蝥素组血清中碱性磷酸酶(ALP)的活力较空白对照组有所升高，对其他相应生化指标均无明显影响。阿霉素组血清中谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)较对照组的酶活力都具有明显增加，血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Crea)含量也明显增大(P<0.05)，提示阿霉素具有一定的肝、肾毒性。NCTD+ADM组血清中的生化指标与空白对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)：NCTD+ADM组与NCTD组及ADM组比较，生化指标也有差异(P<0.05)。 4.肝脏组织学改变NCTD组与空白对照组之间无显著差异，肝脏及肾脏结构清晰，无明显病理变化。ADM组和NCTD+ADM组肝脏及肾脏出现一定的细胞变性，有明显的充血现象和炎性反应，炎细胞澿润，肝细胞出现点状及小灶样坏死等程度的病理变化，说明ADM组和NCTD+ADM组都可引起肝脏和肾脏的损伤。 四、结论 1.本试验建立了以高效液相色谱.质谱联用法检测SD大鼠血浆中去甲斑蝥素的方法，方法简单，专属性强，灵敏度高，准确性好，适于去甲斑螯素(NCTD)在大鼠体内的定量分析和药代动力学研究。 2.去甲斑蝥素在与阿霉素合用后，可改变去甲斑蝥素分布相的转运速率，在多剂量连续给药时可增加去甲斑蝥素在肝脏组织中的聚集，而提高肝脏组织中的药物浓度。 3.实验剂量的去甲斑蝥素与阿霉素的联合化疗比单用阿霉素对肝脏及肾脏的病理损伤相对较小，并对肝脏的损伤有一定的保护作用。

目录

文摘

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前言

第一部分HPLC-MS法测定大鼠血浆中去甲斑蝥素的浓度

1仪器、试药与动物

2方法与结果

3方法学考察

4讨论

5结论

第二部分去甲斑蝥素在大鼠体内与阿霉素合用时的药代动力学研究

1仪器、试药与动物

2去甲斑蝥素在大鼠体内药物浓度的测定方法

3结果

4讨论

5结论

第三部分去甲斑蝥素在大鼠体内与阿霉素合用时的相关毒理指标考察

1试验仪器与材料

2试验方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

综述 去甲斑蝥素抗肿瘤作用及其靶向给药系统的研究进展

致谢

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