活化TLR2诱导单核细胞性白血病THP-1细胞的凋亡和分化

摘要

目的:白血病是造血干细胞恶性转化引起的疾病，其特点之一是细胞分化被阻滞在幼稚阶段，不能产生成熟的功能白细胞，从而导致贫血、出血、感染等一系列临床表现。因而，诱导白血病细胞分化和促进其凋亡成为白血病治疗的新方向。Toll样受体在机体抗微生物感染中发挥着重要作用，其功能为识别微生物的组成分子，诱导抗微生物非特异性的天然免疫应答及炎症反应。树突状细胞表面表达的Toll样受体识别微生物组成分子后，促使其分化成熟同时启动抗原特异性的获得性免疫应答。TLR2能识别多种微生物细胞的组成分子，如细菌脂蛋白、脂磷壁酸、脂多糖(LPS)。细菌脂蛋白通过活化TLR2能诱导THP-1的凋亡，本实验的目的是探讨TLR2的另一配体PGN(肽聚葡糖)诱导单核细胞性白血病THP-1凋亡与分化的可能性，为临床治疗白血病提供新的思路。 方法: (1)RT-PCR检测基因的表达。(2)流式细胞术检测蛋白质的表达。(3)ELISA检测蛋白质的分泌情况。(4)PI-Annexin V染色检测凋亡水平。(5)抗体中和实验检测细胞因子与THP-1凋亡的相关性。(6)Western Blotting检测细胞内信号传导分子的活化。(7)细胞粘附实验检测PGN对细胞粘附的影响。 结果:RT-PCR分析显示THP-1细胞表达除TLR3以外所有的TLRs，流式细胞术检测到THP-1细胞表面表达CD14、TLR2、TLR4蛋白，TLR2配体PGN能上调CD14、TLR2的表达。同时PGN能诱导 THP-1 细胞表达细胞因子 IL-1α、IL-8、TNFα的上调，并能活化TLR2传导通路中的P38、ERK以及 NF-κB，说明 THP-1表达功能性的TLR2受体。PI-Annexin V 染色显示PGN能诱导THP-1细胞的凋亡，并呈时间和剂量依赖性关系。PGN 所诱导的凋亡与自分泌TNFα密切相关，因为PGN能显著上调TNFα的表达，而且TNFα中和抗体能抑制PGN所诱导的凋亡。分析PGN对 THP-1 表达凋亡抑制蛋白的影响，结果显示PGN所诱导的表达改变与TNFα所诱导的改变呈有相似性。此外，PGN还上调单核细胞分化标志CD14、CD11、CD11的表达，并诱导 TAP-1 细胞的粘附，说明PGN能诱导 THP-1的分化，同时PGN上调协同刺激分子CD40、CD80、CD86的表达，提示PGN将可能显著改变TLR2阳性肿瘤细胞的致瘤性。 结论: PGN通过活化TLR2诱导THP-1细胞的凋亡，其机制与自分泌TNFα有关，而且PGN能诱导THP-1细胞的分化并上调协同刺激分子的表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写注解

声明

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、讨论

结论

参考文献

综述 Toll样受体与细胞凋亡和分化

致谢

硕士期间发表的论文