血浆同型半胱氨酸水平，亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与强直性脊柱炎的相关性研究

摘要

研究背景：同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是DNA甲基化修饰代谢的中间产物，其异常升高很可能影响DNA的甲基化过程，并进而影响某些基因的表达而促进疾病的发生发展。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是促使Hcy转化的关键酶，在叶酸和Hcy代谢、DNA甲基化和DNA合成等方面起重要作用。体内外研究表明，慢性叶酸或甲基缺乏与DNA甲基异常有关，并会造成DNA链断裂、染色体重组改变和染色体分离异常。已有研究显示：高Hcy血症可能导致基因组DNA低甲基化，而诱发某些风湿免疫性疾病的产生。目前尚无强直性脊柱炎患者Hcy与基因组DNA甲基化水平的报道。 研究目的：检测强直性脊柱炎(AS)患者Hcy水平，探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与AS间的联系；分析AS患者MTHFR基因C677T突变的多态性，探讨MTHFR基因多态性与AS的相关性，以寻求Hcy，MTHFR基因多态性及去甲基化在AS中可能的发病机制。 研究方法：运用酶联免疫吸附法测定100例AS患者及60名正常人血浆Hcy浓度，应用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)分析MTHFR基因的多态性。对有突变碱基的标本进行DNA测序分析。 结果： ①AS患者血浆Hcy浓度(17.91+/-3.17μmol/L)明显高于对照组(11.97+/-2.14 μmol/L)，两组间差异有统计学意义(t'=14.121，P<0.001)。 ②AS组MTHFR C/C型、C/T型基因频率分布与对照组比较无显著性差异(X2C/C=1.508，X2C/T=0.067，P>0.05)。 ③AS组MTHFR C、T等位基因频率与对照组比较无显著差异(X2=3.008，P>0.05)。 ④AS组MTHFR T/T型基因频率分布与对照组比较有显著差异(17％VS5％，X2T/T=4.937，P<0.05)。 ⑤AS组的MTHFR C/C、C/T、T/T基因型的Hcy水平均高于对照组的相同基因型(tC/C=8.042;tC/T=8.315;tT/T=9.450，P<0.001);AS组和对照组MTHFRT/T型的血浆Hcy水平明显高于同组内MTHFR C/C型和MTHFR C/T型(t=10.279，P<0.001)，而同组内MTHFR C/C型与MTHFR C/T型Hcy的水平比较无显著差异(t=2.712，P>0.05)⑥Logistical回归分析显示高Hcy血症是AS发病的独立危险因素(P<0.001，OR=4.582，95％CI=1.984-10.585)。 ⑦PCR产物测序结果证实酶切分析的方法准确，结果可信。 结论：AS患者血浆Hcy浓度明显高于正常人，高Hcy血症是AS发病的独立危险因素。MTHFR基因T/T型突变是血浆Hcy浓度升高的一个重要影响机制，MTHFR基因T/T型突变可能与AS的发生有相关性。AS患者的高Hcy血症是否可导致某些DNA的低甲基化，以及Hcy对AS患者的MTHFR基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响，有待进一步的研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

第一章前言

第二章对象、材料与方法

2.1研究对象

2.2材料

2.3方法

2.3统计学分析

第三章结果

3.1血浆Hcy浓度比较

3.2 MTHFR-667位点多态性分析

3.3各基因型血浆Hcy浓度比较

3.4 AS危险因素的多元Logstic逐步回归分析

第四章讨论

4.1早期发现AS病人血浆Hcy浓度改变的重要性

4.2 AS患者MTHFR基因突变与血浆Hcy浓度改变的关系

4.3 AS患者MTHFR基因突变与AS发生的相关性

4.4 AS患者高Hcy血症与DNA甲基化的关系

第五章结论

参考文献

综述 DNA甲基化与自身免疫性疾病

致谢

攻读学位期间主要研究成果