LCM纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮组织蛋白质表达谱的建立

摘要

鼻咽癌是一种原发于鼻咽粘膜上皮的恶性肿瘤，是我国南方及东南亚地区最常见的恶性肿瘤之一，严重危害国人的生命和健康。虽然大量的研究结果认为鼻咽癌的发病与EB病毒感染、遗传因素和环境因素有关，但鼻咽癌的发病机制仍然不清楚。高通量的蛋白质组学技术在识别与肿瘤发生发展相关的蛋白质，揭示肿瘤发病机制，发现肿瘤分子标志物等方面具有独特的优势，而肿瘤及其起源组织蛋白质表达谱的建立是肿瘤蛋白质组学研究的重要内容之一。建立鼻咽癌及其起源组织--鼻咽粘膜上皮的蛋白质表达谱，不仅有助于从整体的分子水平阐明鼻咽粘膜上皮的生理功能，而且能为鼻咽癌发生机制的研究以及寻找鼻咽癌分子标志物提供重要的参考资料。 肿瘤组织标本是肿瘤蛋白质组学研究最直接有效的样本，采用组织样本进行蛋白质组学研究常易受到组织的异质性的干扰。为提高蛋白质组学研究结果的准确性，有必要纯化靶细胞用于蛋白质组学研究。LCM技术是目前从组织中纯化细胞的最好方法之一。 为建立鼻咽癌及其起源鼻咽粘膜上皮组织的蛋白质表达谱，本研究以LCM技术纯化的鼻咽癌细胞和正常鼻咽粘膜上皮细胞为样本，采用基于凝胶和非胶的蛋白质组学技术，即双向凝胶电泳联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(2-DE+4-MALDI-TOF MS)；十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳联合电喷雾串联质谱技术(SDS-PAGE+ESI-Q-TOF MS)；二维液相色谱联合电喷雾离子阱串联质谱技术(2D LC+ESI-IT MS)和反相色谱联合电喷雾离子阱串联质谱技术(RP-LC-IT MS)4种技术，分离鉴定鼻咽癌和正常鼻咽上皮组织的蛋白质。研究结果如下： 1.在鼻咽癌和正常鼻咽上皮组织中分别成功鉴定了1037和1006个非冗余蛋白质，并利用生物信息学资源，结合PIGOK、GOA和ExPASy数据库中蛋白质的有关信息，对所鉴定的蛋白质进行了亚细胞定位、功能分类和理化性质的初步分析。 2.建立了两者分辨率高、重复性好的鼻咽癌和正常鼻咽上皮组织的双向凝胶电泳参考图谱，分别鉴定了427和419个蛋白质斑点，包括239和227个非冗余蛋白质，并通过HUP-ML Editor软件进行数据采集，整合入本实验室以Apache+PHP+Xindice软件构建的蛋白质组学数据库系统平台(http：//www.xyproteomics.org/en.)。 本研究首次建立了LCM纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮组织的蛋白质表达谱，丰富了鼻咽癌蛋白质组数据库的有关信息，为鼻咽癌发病机制的研究以及鼻咽癌分子标志物的筛选提供了重要的参考资料。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩写词简表

声明

前言

技术路线

材料与方法

1.材料

2方法

结果

一LCM纯化NPC细胞和正常鼻咽粘膜上皮细胞

二采用四种蛋白质组学技术路线构建蛋白质表达谱

三纯化的NPC和NNET组织蛋白质表达谱的建立及蛋白质的相关信息分析

四采用生物信息学方法构建NPC和NNET组织2DE蛋白质数据库

讨论

结论

参考文献

表1 纯化的NPC组织2DE MS已鉴定蛋白质的详细信息

表2 纯化的NNET组织2DE MS已鉴定蛋白质的详细信息

表3 纯化的NPC组织中所有已鉴定蛋白质的详细信息

表4 纯化的NNET组织中所有已鉴定蛋白质的详细信息

蛋白质组学研究技术与进展

致谢

攻读学位期间主要的研究成果