多潜能成体干细胞内皮分化和高糖对内皮分化的影响及相关信号通路机制探讨

摘要

目的：观察大鼠MAPCs在无外源性生长因子的分化培养条件下向内皮分化过程中细胞形态学，内皮标志物和功能的改变；研究在分化过程中相关生长因子的分泌趋势以及对分化的影响。 方法：大鼠MAPCs作为本实验的研究材料，在无外源性生长因子的分化条件下培养。在分化过程中观察细胞形态学改变。Q-RT-PCR检测内皮细胞标志物CD31、Flk1、vWF、VE-eadherin和干细胞标志物oct4在分化过程中mRNA水平的改变。细胞免疫荧光检测相关内皮细胞标志物和干细胞标志物在分化过程中蛋白水平的改变。ELISA检测大鼠MAPCs分化过程中生长因子分泌的变化。Dil-acLDL和Matrigel用于检测分化后细胞的内皮功能。培养基中加外源性VEGF、VEGF中和抗体和TGFβ1中和抗体，Q-RT-PCR检测相关内皮细胞标志物的改变，研究生长因子对大鼠MAPCs内皮分化的影响。 结果：大鼠MAPCs在无外源性生长因子的分化培养条件下，细胞形态逐渐改变，形成梭形和鹅卵石样的椭圆形细胞。同时也表达内皮细胞标志物CD31、Flk1、vWF和VE-cadherin，并且能摄入Dil-acLDL，在Matrigel上形成二维管状结构。分化的细胞还能分泌VEGF和TGFβ1，外源性的VEGF和VEGF中和抗体对大鼠MAPCs的CD31和Flk1表达无影响(P>0.05)，而TGFβ1中和抗体则在分化第3天显著降低细胞CD31和Flk1的表达(P<0.05)。 结论：首次报道了大鼠MAPCs在无外源性生长因子的条件下亦能向内皮细胞分化，其自身能够分泌VEGF(一过性)和TGFβ1(持续性)。我们的研究结果进一步提示：在大鼠MAPCs中，是TGFβ1而不是VEGF在其内皮分化过程起作用。

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英文文摘

论文说明：缩略词表

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引言

第一章大鼠MAPCs培养和内皮分化的研究

1.前言

2.实验材料与仪器

3实验方法

3.1大鼠MAPCs培养

3.2 MAPCs内皮分化的研究

3.3大鼠MAPCs分泌生长因子的检测及其在内皮分化中的作用

4实验结果

4.1细胞形态学改变

4.2内皮细胞和干细胞标志物在分化过程中的改变

4.3内皮细胞功能试验

4.4大鼠MAPCs产生VEGF和TGFβ1

4.5 VEGF或TGFβ1对大鼠MAPCs内皮分化标志物的影响

5.分析讨论

第二章高糖对大鼠MAPCs的影响

1.前言

2.材料与仪器

2.1实验材料

2.2实验仪器

2.3实验相关试剂的配制

3.实验方法

4.讨论

结论

参考文献

综述 生长因子与新血管的形成

致谢

攻读博士期间主要研究成果