雌激素对人视网膜色素上皮ARPE-19细胞氧化应激的保护作用

摘要

目的： 探讨雌激素对蓝光及过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮ARPE-19细胞内活性氧生成以及细胞死亡的保护作用，并观察雌激素对氧化诱导的Akt活化及其下游效应蛋白Bad磷酸化的影响，以探讨Akt/Bad通路在雌激素抗氧化机制中发挥的作用。 方法： (1)对离体培养的人视网膜色素上皮ARPE-19细胞接种于12孔板后分为对照组、E2组和ICI+E2组：对照组无药物处理、E2组予10nM、100nM、1μM E2预处理2h、ICI+E2组予雌激素受体拮抗剂ICI1827801μM联合10nM E2共同处理2h，以蓝光照射(2000±500Lx，470±20nm)或过氧化氢(H2O2，200uM)作氧化处理，在氧化处理前(0时相)以及氧化处理后30min、1h、2h、4h以2'7'-二氯荧光乙酰乙酸钠(DCFH-DA)检测细胞内ROS荧光强度； (2)ARPE-19细胞接种于96孔板或6孔板，分为空白对照组(氧化-，药物-)、阴性对照组(氧化+，药物-)、E2组和ICI+E2组。E2组予10nM、100nM、1μM E2预处理2h，ICI+E2组予1μM ICI182780联合10nM、100nM、1μME2共同预处理2h，以蓝光照射(2000±500Lx，470±20nm)或H2O2，400uM作氧化处理12h。以MTT比色法检测细胞活性变化、以Hoechst染色以及Annexin V FITC-PI双染流式细胞术法检测细胞凋亡； (3)ARPE-19细胞接种于6孔板，以Western Blot免疫印迹法检测：1)10nM E2处理后0、30min、1h、3h、6h、12h、24h时间点的P-Akt表达；2)比较10nME2、1μM ICI182780+10nM E2处理后0、1h、3h、6h时间点的P-Akt表达；3)比较对照组和E2组(10nM E2预处理24h)在接受蓝光照射(2000±500Lx，470±20nm)或200uM H2O2处理后0、30min、1h、2h时间点的P-Akt、P-Bad表达；4)比较对照组、E2组(10nM E2预处理24h)、ICI+E2组(1μM ICI182780+10nM E2预处理24h)在0时相、蓝光照射(2000±500Lx，470±20nm)后1 h、H2O2(200μM)处理后30min的P-Akt表达。 结果： (1)蓝光照射和过氧化氢均可显著增强ARPE-19细胞内的ROS荧光，提示蓝光照射和过氧化氢处理均成功诱导氧化应激，10nM、100nM、1uM17β-雌二醇剂量依赖性地减低蓝光照射和过氧化氢处理后ARPE-19细胞内的ROS荧光增强的幅度，1μICI182780能阻断10nM E2对蓝光照射诱导ROS生成的抑制作用，但不能阻断10nME2对过氧化氢诱导ROS生成的抑制作用； (2)10nM、100nM、1uM17β-雌二醇可减弱以蓝光照射和H2O2处理建立的实验氧化应激模型对ARPE-19活性的影响，降低细胞的凋亡率和死亡率。10nM17β-雌二醇这一保护作用可被1μMICI182780阻断； (3)10nM17β-雌二醇能诱导ARPE-19细胞一过性的p-Akt表达；10nM17β-雌二醇预处理24小时能使蓝光照射和H2O2处理诱导的P-Akt、P-Bad表达显著增强。1uM ICI182780可阻断10nM17β-雌二醇诱导的一过性P-Akt表达以及对蓝光照射和H2O2处理诱导的P-Akt表达的增强作用。 结论： 雌激素17β-雌二醇能通过依赖或非依赖雌激素受体的方式减少蓝光照射及过氧化氢处理诱导的ARPE-19细胞内活性氧生成，并通过雌激素受体依赖的方式保护氧化应激诱导的细胞死亡和凋亡，Akt/Bad细胞信号传导通路参与介导了这一保护作用。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词注解

声明

前言

第一章 雌激素对蓝光及过氧化氢诱导的ARPE-19细胞内活性氧生成的影响

1.0引言

1.1材料与方法

1.2结果

1.3讨论

1.4结论

第二章 雌激素对氧化应激诱导的ARPE-19细胞死亡的保护作用

2.0引言

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

2.4结论

第三章 雌激素对氧化应激诱导人视网膜色素上皮细胞Akt活化的增强作用

3.0引言

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

3.4结论

总结

参考文献

综述 年龄相关性黄斑变性与氧化应激

攻读学位期间主要研究成果

致谢