异病同证之肝阳化风证的蛋白质组学研究及PRX3在肝阳化风证的表达及意义

摘要

目的:通过研究脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病肝阳化风证（异病同证）患者及健康人外周血的蛋白质组学研究，并进行相关蛋白质验证，以探讨异病同证之肝阳化风证的分子本质内涵。 方法分别分离出脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病肝阳化风证各组患者及健康人外周血单个核细胞，采用二维凝胶电泳分离各组总蛋白质，获得差异表达蛋白质，制备各组蛋白质组表达图谱，PDQuest软件分析，并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）和数据库对差异表达的蛋白质分析鉴定。选择肝阳化风证有意义的蛋白进行验证，采用逆转录.多聚酶链式反应（RT-PCR）法检测正常组及肝阳化风证组PRX3基因表达水平。 结果 1.建立了脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病四病之肝阳化风证患者及健康人外周血单个核细胞蛋白质表达图谱；脑梗塞肝阳化风证组与健康对照组比较有21个相同表达的蛋白质，17个差异蛋白表达，其中13个蛋白质较健康对照组表达下调，4个较健康对照组表达上调，脑出血肝阳化风证组与健康对照组比较有22个相同表达的蛋白质，21个差异蛋白表达，其中18个蛋白质较健康对照组表达下调，3个较健康对照组表达上调，帕金森病肝阳化风证组与健康对照组比较有23个相同表达的蛋白质，20个差异蛋白表达，其中18个蛋白质较健康对照组表达下调，2个较健康对照组表达上调，颈椎病肝阳化风证组与健康对照比较有17个相同表达的蛋白质，15个差异蛋白表达，其中13个蛋白质较健康对照组表达下调，2个蛋白质较健康对照组表达上调，而四病的肝阳化风证共有5个表达相同的蛋白质，且表达均较健康对照组表达下调。鉴定出的蛋白质根据涉及的功能进行分类：包括细胞骨架蛋白、代谢酶类、细胞信号转导蛋白、抗氧化蛋白、血液蛋白等。 2.差异蛋白验证结果：RT-PCR法证实PRX3在各组的表达水平与2-DE结果一致：与健康对照组表达比较，脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病四病的肝阳化风证PRX3表达量均明显下调（p<0.05），而四病各组间PRX3表达无差异（p>0.05）。 结论 1.初步建立了脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病肝阳化风证患者及健康人对照组的外周血单个核细胞蛋白质表达图谱。 2.脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病四病的肝阳化风证（异病同证）患者具有相同及差异表达的蛋白质，提示异病同证既有证的共同的物质基础（相同的蛋白质表达），又有疾病本身不同的特点（差异蛋白质表达）。 3.PRX3的RT-PCR验证结果与2-DE结果一致，提示蛋白质组学检测的准确性，可靠性。 4.异病同证之肝阳化风证均有PRX3表达，并均较健康对照组相比下调，且脑出血，脑梗塞，颈椎病，帕金森病四病间的肝阳化风证的PRX3组间表达无明显差异，提示PRX3蛋白可能为肝阳化风证特异性蛋白。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词汇集表

声明

前言

第一章 中医肝阳化风证患者和健康人外周血淋巴细胞二维凝胶图谱的建立

第二章质谱分析

第三章 差异蛋白质PRX3结果验证

第四章结论

参考文献

附 表肝阳化风证病例辨证计分表

综述中医肝阳化风证的现代研究进展

致谢

在校期间科研成果及发表论文