缺氧对鼠视网膜Müller细胞GS和GLAST调控作用的研究

摘要

目的：研究缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）与谷氨酸转运体GLAST（L-glutamate/L-aspartate transporter）的调控作用。 方法：（1）采用组织块培养方法培养出生后7-10天（P7-10）小鼠视网膜Müller细胞。（2）实验分组：①缺氧干预组：在体外培养的鼠视网膜Müller细胞溶液中加入CoCl2进行缺氧干预6h、12h、18h、24h、48h、72h；②对照组：Müller细胞溶液中不加CoCl2，仍按含20％胎牛血清的DMEM进行常规培养。（3）采用免疫细胞化学染色方法检测两组Müller细胞GS与GLAST蛋白质表达的变化。（4）采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法分析两组Müller细胞GSmRNA与GLASTmRNA表达的差异。 结果：（1）免疫细胞化学显示GS蛋白定位于视网膜Müller细胞胞浆中；GLAST蛋白定位于视网膜Müller细胞胞浆中和胞膜上。随着缺氧时间的延长，干预组Müller细胞GS和GLAST蛋白质表达量均逐渐增加，24h时GS、GLAST蛋白的表达量达到最大，明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。随着缺氧时间进一步延长，二者蛋白质的表达量出现下降趋势，并在72h表达最弱。（2）随着缺氧时间的延长，GSmRNA与GLASTmRNA表达量均逐渐增加，当缺氧时间达到为24h时，GSmRNA与GLASTmRNA表达量达到最大，其扫描灰度值分别为：0.7967±0.1986、0.7333±0.059，较对照组有明显的增加（P<0.05）。随着缺氧时间进一步延长，二者mRNA的表达量出现下降趋势，并在72h表达最弱。 结论：在一定时间范围内缺氧可上调鼠视网膜Müller细胞GS、GLASTmRNA和蛋白质的表达，从而可能增加鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶和谷氨酸转运体活性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写中英文对照

声明

第一章前言

第二章材料和方法

2.1材料

2.2方法

第三章结果

3.1视网膜Mùller细胞的培养和鉴定

3.2不同时间点视网膜Mùlle细胞GS蛋白质的表达差异

3.3不同时间点视网膜Mùlle细胞GS mRNA表达的差异

第四章讨论

4.1视网膜Mùller细胞

4.2谷氨酰胺合成酶与谷氨酸转运体

4.3缺氧与Mùller细胞GS、GLSAT的调控

第五章 结论

参考文献

综述 谷氨酸对青光眼视神经的兴奋性毒性作用

致谢