拉西地平抗同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管新生能力减低作用及机制

摘要

目的：通过观察拉西地平对同型半胱氨酸（homocysteine Hcy）所致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）增殖抑制、小管样结构形成抑制以及对血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）表达等作用的影响，探讨拉西地平保护Hcy所致内皮细胞损伤的可能作用机制，从而为临床治疗提供实验依据。 方法：以离体培养的HUVEC为模型，采用四氮唑蓝比色法（MTT法）测定不同浓度下拉西地平对抗Hcy所致HUVEC增殖抑制的效果；流式细胞仪测定拉西地平对细胞增殖周期的影响；小管形成试验测定拉西地平对HUVEC小管样结构形成的影响；Realtime-PCR检测拉西地平对HUVEC的VEGF表达的影响。 结果：拉西地平在1×10-3 mmol/L、1×10-2 mmol/L时能对抗Hcy所致HUVEC的增殖抑制，与Hcy损伤模型组相比有显著差异（P<0.05），具有统计学意义；在未加Hcy组，拉西地平对HUVEC无增殖效果，与空白对照组差异无显著性（P>0.05），浓度在1×10-4mmol/L则无上述效果。同时，Hcy损伤组G0-G1期细胞数明显增多（P<0.05），S期细胞数明显减少（P<0.05），而加拉西地平1×10-3 mmol/L、1×10-2 mmol/L损伤组则趋于正常，预示能对抗Hcy的抑制作用，但正常细胞加拉西地平组，相对空白对照组无明显差异（P>0.05）。小管形成试验中，Hcy损伤模型组小管形成减少，在同时加入的拉西地平浓度为1×10-3 mmol/L、1×10-2 mmol/L时能对抗这种效果；在未加Hcy损伤组，拉西地平则无明显促小管形成效果。在Realtime-PCR测定在Hcy损伤模型组，拉西地平在浓度为1×10-3 mmol/L、1×10-2mmol/L时能明显上调VEGF的表达，与损伤模型组之间存在差异显著性（P<0.05），具有统计学意义；在未损伤组则无上调VEGF的表达效果。 结论：拉西地平能对抗同型半胱氨酸所致的人脐静脉血管内皮细胞增殖抑制以及小管样结构的形成抑制，其原理可能和其上调被同型半胱氨酸损伤的内皮细胞的VEGF表达有关，提示该药在冠心病中缺血心肌新生血管的发生和发展中可能具有一定作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词汇表

声明

实验技术路线图

第一章前言

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1主要试剂

2.1.2主要仪器

2.1.3细胞株

2.2方法

2.2.1细胞培养

2.2.2药物处理及分组

2.2.3 MTT法测其对HUVEC的增殖作用

2.2.4流式细胞仪测定拉西地平对细胞增殖周期的影响

2.2.5 小管形成试验测定其对小管样结构形成影响

2.2.6 Real time-PCR测定VEGF mRNA的表达

2.3统计处理

第三章结果

3.1 MTT法测其对HUVEC的增殖作用

3.2流式细胞仪测定拉西地平对细胞增殖周期的影响结果

3.3小管形成试验测定其对小管样结构形成影响结果

3.4 拉西地平对VEGF mRNA表达的影响

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述：拉西地平在治疗冠心病中的作用

致谢

攻读学位期间主要的研究成果