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论文说明:缩略词
第一章 前言
第二章 材料与方法
2.1 试剂和仪器
2.1.1 主要试剂和药品
2.1.2 主要溶液的配制
2.1.3 主要仪器
2.2 样本、临床资料的收集和处理
2.3 外周血基因组DNA的提取
2.4 EPHX2 rs1042032基因分型
2.4.1 引物设计
2.4.2 PCR扩增
2.4.3 PCR产物酶切分型
2.5 miR-146a rs2910164基因分型
2.5.1 引物设计
2.5.2 PCR扩增
2.5.3 PCR产物酶切分型
2.6 琼脂糖凝胶电泳
2.7 人外周血单个核细胞(PBMC)的提取
2.8 mRNA提取和实时定量PCR(real-time PCR)
2.8.1 mRNA的提取
2.8.2 逆转录合成cDNA
2.8.3 Real-time PCR
2.9 报告基因质粒构建
2.9.1 目的片段PCR扩增
2.9.2 PCR产物的回收
2.9.3 连接T克隆载体
2.9.4 转化
2.9.5 提取质粒DNA
2.9.6 报告基因质粒的连接
2.9.7 报告基因质粒的鉴定
2.10 细胞瞬时转染
2.11 报告基因荧光素酶活性的检测
2.11.1 转染后细胞的裂解
2.11.2 检测荧光
2.12 miR-146a对HUVEC中EPHX2表达的影响
2.12.1 miR-146a模拟物处理内皮细胞
2.12.2 miR-146a以及EPHX2 mRNA表达测定
2.13 统计分析
第三章 结果
3.1 miRNA-146a和EPHX2基因多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关联关系分析
3.1.1 病例组与对照组人群一般情况比较
3.1.2 EPHX2 rs1042032多态性基因分型
3.1.3 miR-146a rs2910164(G/C)多态性分基因分型
3.1.4 EPHX2 rs1042032多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关联关系分析
3.1.5 miR-146a rs2910164多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关联关系分析
3.2 miR-146a与EPHX2基因遗传多态性相互作用对缺血性脑卒中遗传易感性的影响
3.3 EPHX2 rs1042032和miR-146a rs2910164多态性对缺血性脑卒中患者PBMC中EPHX2 mRNA及miR-146a表达水平的影响
3.3.1 rs1042032多态性对IS患者PBMC中EPHX2 mRNA表达水平的影响
3.3.2 miR-146a rs2910164多态性对IS患者PBMC中miR-146a表达水平的影响
3.3.3 IS患者PBMC中miR-146a与EPHX2 mRNA表达水平的相关性分析
3.3.4 EPHX2 rs1042032和miR-146a rs2910164多态联合基因型对IS患者PBMC中EPHX2 mRNA和miR-146a表达水平的影响
3.4 报告基因实验确定EPHX2 rs1042032和rs1042064多态性的功能
3.4.1 报告基因质粒的构建、定点突变和鉴定
3.4.2 pGL3-EPHX2 rs1042032-A质粒和pGL3-EPHX2 rs1042032-G质粒报告基因活性的测定
3.4.3 miR-146a对PGL3-EPHX2质粒报告基因活性的影响
3.5 miR-146a模拟物对HUVEC中miR-146a和EPHX2 mRNA表达的影响
附图
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
综述 microRNA与心血管疾病研究进展
致谢
攻读学位期间主要的研究成果
中南大学;