纳洛酮通过调节XIAP/Caspase-9表达抑制大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡

摘要

目的:
　　 近年来的研究表明，在脑缺血再灌注发生后3-8小时内细胞凋亡程序已启动，如果在缺血后及时治疗，部分脑细胞仍有可能恢复正常。许多研究已经证实:凋亡途径一旦启动，会引起一系列的凋亡分子改变，通过正反馈或负反馈加重细胞凋亡;X连锁凋亡抑制蛋白（X-linkedInhibitor of Apoptosis Protein，XIAP）能调节凋亡启动分子Caspase-9和效应分子Caspase-3的表达及活性，影响下游效应分子Bcl-2/Bax的表达，从而抑制神经细胞的凋亡。另有研究显示，纳洛酮可抑制脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡。但关于脑缺血再灌注损伤后采用纳洛酮干预是否能通过调节XIAP/Caspase-9的表达变化而抑制脑神经细胞的凋亡，目前还未见报道。
　　 本研究着重分析采用纳洛酮干预后，大鼠脑缺血再灌注的局灶性脑损伤组织中XIAP与Caspase-9的表达变化，为脑缺血再灌注纳洛酮干预提供新的认识。
　　 方法:
　　 根据Zea Longa提出的可逆性大脑中动脉闭塞(MCAO)线栓法构建SD大鼠脑缺血再灌注模型，将成功构建的SD大鼠模型随机等分成生理盐水处理组（对照组）和纳洛酮处理组（实验组），两组分别腹腔注射等剂量生理盐水和纳洛酮，用Real time RT-PCR和Westernblot分别检测两组大鼠0h、6h、24h、72h四个时间点的XIAP和Caspase-9的mRNA和蛋白表达，并用Tunel染色法检测脑细胞凋亡。
　　 结果:
　　 Tunel染色结果表明，纳洛酮组在缺血再灌注后6h、24h和72h时间点脑细胞凋亡均较生理盐水组明显减少。Real time RT-PCR和Western blot结果显示:生理盐水组和纳洛酮组中XIAP mRNA和蛋白表达水平在再灌注0h后开始下降，6h后出现上升趋势;相比生理盐水组，0h时间点两组XIAP mRNA和蛋白水平没有明显差异(p＞0.05)，但6h、24h和72h，前者明显高于后者[XIAP mRNA(F=1072.778p＜0.001);XIAP蛋白(F=365.2，p＜0.01)];另外，在0h时间点，纳洛酮组和生理盐水组Caspase-9 mRNA和蛋白水平均较低，其后开始上升，但纳洛酮组在6h后出现下降趋势，而生理盐水组则继续上升;在0h和6h两个时间点，生理盐水组与纳洛酮组之间没有明显差异(p＞0.05);24h和72h时间点，纳洛酮组Caspase-9的mRNA和蛋白水平明显低于生理盐水组[caspse-9 mRNA(F=172.5 P=0.016);caspase-9蛋白(F=413.781 p＜0.001)]。
　　 结论:
　　 纳洛酮可抑制脑缺血再灌注损伤后脑细胞凋亡的发生，保护神经元活性，其机制可能是通过上调XIAP的mRNA及蛋白表达，抑制Caspase-9的mRNA及蛋白表达而对凋亡产生影响。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第一章 材料与方法

1．主要实验材料和试剂

2．主要仪器

3．实验方法

4．统计学分析

第二章 结果

1．纳洛酮对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

2．纳洛酮对脑缺血再灌注后神经细胞XIAP mRNA表达的影响

3．纳洛酮对脑缺血再灌注后神经细胞Caspase-9 mRNA表达的影响

4．纳洛酮对脑缺血再灌注后神经细胞XIAP蛋白表达的影响

5．纳洛酮对脑缺血再灌注后神经细胞Caspase-9蛋白表达的影响

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

综述

致谢