TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞上皮间质转化及肿瘤干细胞相关标记表达的动态观察

摘要

目的：结合上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)与肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)学说，初步研究EMT是否能使涎腺腺样囊性癌细胞的干细胞相关标记的表达产生变化，并讨论其意义。
　　 方法：(1) TGF-β1诱导培养ACC-M细胞发生EMT的形态学动态观察:体外培养涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M，经TGF-β1诱导后连续观察其细胞形态的变化;(2)TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞EMT及CSCs相关标记物表达的变化:实验分两组，实验组ACC-M细胞培养时加入TGF-β1使其浓度达到10ng/ml，对照组加入等量PBS液;流式细胞术检测培养0h、24h、48h后ACC-M细胞的EMT相关标记物E-cad、N-cad、vimentin，以及肿瘤干细胞相关标记物Oct-4的表达情况;实验结果经SPSS11.0软件统计，采用重复测量数据方差分析中的广义线性模型(General Linear Model，GLM)进行数据分析。
　　 结果：
　　 1.在体外培养中，经TGF-β1诱导的ACC-M细胞形态发生了明显的变化，由最初的紧密排列的多边形，变成了松散、杂乱的梭形。
　　 2.E-cad实验组与对照组的表达不满足球形对称，校正自由度后两组差别具有统计学意义（P＜0.05），各时间点之间差别有统计学意义（P＜0.001），且时间与分组存在交互效应，即培养时间越长，TGF-β1的作用越明显（P＜0.05）;N-cad实验组与对照组的表达满足球形对称，两组差别具有统计学意义（P＜0.05），各时间点之间差别有统计学意义（P＜0.001），且时间与分组存在交互效应（P＜0.05）;vimentin实验组与对照组的表达满足球形对称，两组差别具有统计学意义（P＜0.05），各时间点之间差别有统计学意义（P＜0.001），且时间与分组存在交互效应（P＜0.05）;
　　 3.Oct-4实验组与对照组的表达不满足球形对称，校正自由度后两组差别具有统计学意义（P＜0.05），各时间点之间差别有统计学意义（P＜0.001），且时间与分组存在交互效应（P＜0.05）
　　 结论：
　　 1.TGF-β1能够使涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M发生形态学上的EMT变化;
　　 2.TGF-β1能够上调间质细胞表面标记N-cad、vimentin的表达，下调上皮细胞表面标记E-cad的表达;
　　 3.TGF-β1能够下调转录因子Oct-4的表达，可能参与调节肿瘤干细胞中细胞亚群的比例。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略词表

前言

实验一 TGF-β1 诱导培养后ACC-M细胞发生EMT的形态学动态观察

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

实验二 TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞EMT相关标记物表达的变化

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

实验三 TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞CSCs相关标记物表达的变化

1．材料与方法

2．结果

3．讨论

全文结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间主要学术成果