NgR基因沉默与NT-3基因过表达联合作用对大鼠神经干细胞增殖的影响

摘要

目的:随着交通运输和建筑事业的发展，脊髓损伤(SCI)的发病率呈逐年增加的趋势。脊髓损伤的治疗是世界性难题，神经干细胞(NSCs)移植和基因治疗，是治疗脊髓损伤的两个重要的研究途径。研究NgR基因沉默与NT-3基因过表达联合作用对大鼠神经干细胞增殖的影响，为体内移植的研究和临床应用提供必要的实验依据。
　　 方法:根据文献选择沉默效率最高的siRNA构建NgR的干扰载体，同时构建NT-3过表达载体质粒;分别包装慢病毒;制备神经干细胞;慢病毒转染神经干细胞，此步骤分为5个组:空白对照组(Con)、慢病毒空载体组(NC)、NT-3过表达组、NgR干扰组、NT-3过表达+NgR干扰组;采用Western Blot的方法检测NT-3过表达组、NgR干扰组目的基因的表达情况;分别收集转染后的各组神经干细胞进行MTT检测细胞增殖能力;PI单染流式检测细胞周期。
　　 结果:
　　 1.MTT检测:种板72h内不同时间点各组细胞OD值均呈上升趋势，表明细胞增殖分裂能力均不同程度增强，其中以anti-NgR+NT-3组神经干细胞增强最为明显(p＜0.05），而NT-3组和anti-NgR组神经干细胞增殖分裂能力也均强于空白对照组和慢病毒空载体组(p＜0.05）。
　　 2.PI单染流式检测细胞周期:处于S期的anti-NgR+NT-3组神经干细胞占本组所有细胞的比例为36.88％，高于其余各组，处于S期的NT-3组神经干细胞占本组所有细胞的比例为21.17％，处于S期的anti-NgR组神经干细胞占本组所有细胞的比例为20.73％，均高于空白对照组和慢病毒空载体组。表明anti-NgR+NT-3组神经干细胞增殖分裂能力明显强于其他各组(p＜0.05），而NT-3组和anti-NgR组神经干细胞增殖分裂能力均明显强于空白对照组和慢病毒空载体组（p＜0.05）。
　　 结论:
　　 1.NgR基因沉默与NT-3基因过表达单独作用均能促进神经干细胞增殖分裂。
　　 2.NgR基因沉默与NT-3基因过表达联合作用，能使神经干细胞增殖分裂能力明显增强，且强于NgR基因沉默与NT-3基因过表达单独作用于神经干细胞。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 材料和仪器

2．1．1 试剂

2．1．2 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 构建NgR干扰载体质粒

2．2．2 构建NT-3过表达载体质粒

2．2．3 慢病毒包装

2．2．4 制备神经干细胞

2．2．5 慢病毒转染神经干细胞

2．2．6 Western Blot检测

2．2．7 MTT检测

2．2．8 流式细胞检测

2．2．9 统计学分析

第三章 结果

3．1 载体构建结果

3．2 慢病毒滴度测定结果

3．3 Western Blot的检测结果

3．4 MTT检测结果

3．5 流式细胞检测结果

第四章 讨论

4．1 神经干细胞移植对脊髓损伤的作用

4．2 NgR基因沉默对神经干细胞和脊髓损伤的作用

4．3 NT-3基因过表达对神经干细胞和脊髓损伤的作用

4．4 NgR基因沉默与NT-3基因过表达联合作用对神经干细胞的作用

第五章 结论

第六章 本研究的意义及待解决的问题

附图

参考文献

综述

致谢

攻读硕士学位期间主要研究成果