腺苷通路在膀胱出口梗阻所致膀胱纤维化的机制研究

摘要

目的:通过对大鼠膀胱出口梗阻导致的膀胱纤维化模型进行研究，初步探讨腺苷通路在膀胱逼尿肌纤维化过程中的作用机制。
　　方法:体重约150g的健康wistar大鼠24只，随机分为4组每组6只:空白对照组、假手术组、膀胱纤维化组、膀胱纤维化+茶碱干预组。假手术组仅做下腹部正中切口及分离膀胱颈部，不行膀胱出口结扎。茶碱干预的开始时间为手术后第一天(剂量为10mg/kg/d)，干预时间为6周。用免疫组织化学法和实时荧光定量(Real-TimePCR)的方法检测膀胱组织中纤维化相关指标:Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及与腺苷代谢密切相关的胞外-5'-核苷酸酶(CD-73)的表达以及变化，并进行统计学分析，观察各组之间表达的差异。
　　结果:空白对照组和假手术组Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胞外-5'-核苷酸酶（CD-73）的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。与空白对照组相比膀胱出口梗阻组的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β(TGF-β)表达上调、胞外-5'-核苷酸酶(CD-73)的表达下降并且差异有统计学意义(P＜0.05)。与膀胱出口梗阻组相比茶碱干预组的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达下调、胞外-5'-核苷酸酶（CD-73）的表达上升差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:1、膀胱出口梗阻后膀胱组织中TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达增加，CD-73表达下调。
　　2、腺苷受体阻断剂茶碱可以抑制膀胱出口梗阻后导致的TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达。
　　3、CD-73mRNA的表达下调可能和腺苷的反馈调节机制有关。

目录

声明

摘要

中英文对照表

1 前言

2 实验材料以及实验方法

2．1 茶碱对膀胱出口梗阻致纤维化模型的影响

2．1．1 实验分组

2．2 膀胱出口梗阻致膀胱纤维化模型的建立及检测

2．2．1 手术器械、仪器

2．2．2 试剂

2．2．3 实验动物

2．2．4 实验动物喂养

2．2．5 动物建模方法

2．2．6 尿流动力学检测

2．2．7 结果

2．2．8 小结及结果分析

2．3 免疫组织化学实验

2．3．1 实验试剂与耗材

2．3．2 仪器与设备

2．3．3 试剂配制

2．3．4 实验方法

2．4 Real-time PCR实验

2．4．1 RNA的提取和逆转录反应

2．4．2 实时荧光定量PCR检测cDNA

2．5 统计分析

3 实验结果

3．1 免疫组织化学结果

3．2 实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)

4 讨论

4．1 膀胱出口梗阻后致纤维化膀胱组织形态以及功能变化

4．2 膀胱出口梗阻后对TGF-p、ColⅠ、ColⅢ、CD-73表达的影响

4．2．1 膀胱出口梗阻后促进TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达

4．2．2 膀胱出口梗阻后下调CD-73的表达

4．3 茶碱干预对膀胱出口梗阻后抑制TGF-β、ColⅠ、ColⅢ的表达

5 结论

参考文献

综述 腺苷和器官纤维化研究的进展

致谢

攻读硕士学位期间研究成果