新疆不同民族宫颈HPV感染现状及与Treg细胞相关性研究

摘要

第一部分、新疆乌鲁木齐市宫颈癌HPV分型流行病学研究
　　目的:调查乌鲁木齐市妇女生殖道不同型别人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况以及在人群中的分布。
　　方法:采用整群分层的抽样方法对乌鲁木齐市沙依巴克区18～64岁的女性开展以人群为基础的宫颈癌筛查。签署知情同意书后，对合格对象进行流行病学问卷调查。采集受试者宫颈脱落细胞，进行液基细胞学检测、HPV分型基因芯片检测。液基细胞学(LCT)检测，LCT异常者进行阴道镜及宫颈组织病理活检。以病理结果作为诊断宫颈CIN的金标准。
　　结果:
　　1.该人群HPV-DNA阳性检出率为20.28％，高危型HPV阳性人群中以16、58、52和18型最多。
　　2.高危型HPV阳性率在18～34、35～44、45～64年龄组的阳性率依次为18.07％、29.64％和7.64％(x2=105.02，P＜0.05)。其中35～44岁、17～34和45～64岁三个年龄组的阳性率差异均具有显著性(x2=19.43，P＜0.05;x2=22.62，P＜0.01; x2=66.17，P＜0.01;)。
　　3.HPV感染率随着宫颈病变的加重呈趋势性增加(x2=697.72，P＜0.05;)。
　　4.外来务工人员、白领阶层、居民区人员和服务业从业妇女HPV感染率分别为24.67％，12.19％，12.74和35.11％。服务业妇女HPV感染率明显高于白领人员、居民区人员及外来务工人员(x2=74.46, P＜0.05和x2=84.93, P＜0.05;x2=13.41, P＜0.05);而外来务工人员HPV感染率明显高于白领人员、居民区人员(2=27.56, P＜0.05和x2=29.88, P＜0.05)。
　　结论:乌鲁木齐市HPV高危型别以16、58、52和18型最多，中年妇女是HPV高感染年龄组，不同职业中，服务业人员HPV感染率高，应加强监控。
　　第二部分、新疆汉族、维吾尔族、哈萨克族生殖道HPV感染分型的研究
　　目的:调查新疆维吾尔族、汉族、哈萨克族妇女生殖道不同型别人乳头瘤病毒(HPV)的感染状况以及在人群中的分布。
　　方法:采用整群分层的抽样方法对新疆18～64岁的女性开展以人群为基础的宫颈癌筛查。签署知情同意书后，对合格对象进行流行病学问卷调查。采集受试者宫颈脱落细胞，进行液基细胞学检测、HPV分型基因芯片检测。液基细胞学(LCT)检测，LCT异常者进行阴道镜及宫颈组织病理活检。以病理结果作为诊断宫颈CIN的金标准。
　　结果:
　　1.结婚次数，文化程度，吸烟史，人工流产数，避孕套使用，性伴数，近5年内的性伴侣数以及人群来源等与维吾尔族HPV感染相关，四个变量（文化程度、性伴侣数、避孕套使用和人群来源）进入了多因素分析模型。
　　2.维吾尔族、汉族、哈萨克族比较：维吾尔族HPV感染率最高，与汉族、哈萨克族比较有统计学意义。
　　3.汉族高危型HPV阳性人群中以16、58、52、18和31型HPV阳性者最多，维吾尔族高危型HPV阳性人群中以16、58、31、52和68、39型HPV阳性者最多，哈萨克族高危型HPV阳性人群中以16、18、58、33型HPV阳性者最多。
　　4.三个民族HPV感染率随着宫颈病变的加重呈趋势性增加，三个民族CINⅡ及CINⅢ发生率比较，有统计学差异，其中维吾尔族发生率最高，与其他两组比较，均有统计学意义。
　　结论:文化程度和避孕套使用是HPV感染的保护因素，性伴侣数和人群来源是HPV感染的危险因素。维吾尔族HPV感染率最高，三个民族高危型HPV感染型别不同，三个民族HPV感染率随着宫颈病变的加重呈趋势性增加。
　　第三部分、维吾尔族宫颈癌HPV与Treg免疫逃避机理的研究
　　目的:探讨维吾尔族宫颈癌患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-调节性T细胞及血清中TGF-β、IL-10及IFN-γ的表达及意义。检测维吾尔族宫颈病变不同时期以及对照组外周血CD4+CD25High Treg及其特异标志物Foxp3的表达，探讨CD4+CD25HighTreg和Foxp3在维吾尔族宫颈癌发病机制中的作用。探讨维吾尔族宫颈癌人乳头瘤病毒与CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的相关性。
　　方法:采用流式细胞术检测66例维吾尔族宫颈癌患者、35例宫颈CINⅡ-Ⅲ患者、45例宫颈CINⅠ患者和40例正常对照组外周血中T细胞亚群、CD4+CD25+CD127lo/-Treg含量及CD4+CD25HighTreg含量，采用ELISA法检测血清中TGF-β、IFN-γ和IL-10的表达水平。并比较术前术后宫颈癌患者各组指标的变化。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD4+CD25+T细胞中Foxp3mRNA表达水平。采用HPV(human papilloma viruse HPV)核酸扩增分型检测试剂盒检测66例维吾尔族宫颈癌患者、35例宫颈CIN(宫颈上皮内瘤样病变cervical intraepithelial neoplasia CIN)Ⅱ-Ⅲ患者、45例宫颈CINⅠ患者和40例正常对照组HPV分型。
　　结果:
　　1.宫颈癌与宫颈CINⅡ-Ⅲ患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比以及各组细胞因子的含量与宫颈CINⅠ组及正常对照组比较均有统计学差异(P均＜0.05)。
　　2.宫颈癌及宫颈CIN组IFN-γ含量与CD4+CD25+CD127lo/-T reg含量呈负相关(r=-0.585，P=0.000);TGF-β、IL-10与CD4+CD25+CD127lo/-Treg含量呈正相关(r=0.690，P=0.000，r=0.827，P=0.000)。
　　3.宫颈癌患者手术前后外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg与TGF-β、IL-10及IFN-γ含量的比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。
　　4.CD4+CD25+T细胞中Foxp3 mRNA表达水平，宫颈癌组与宫颈CINⅠ组及正常对照组比较均有统计学差异（P均＜0.05）。
　　5.宫颈癌组及宫颈CINⅡ-Ⅲ组CD4+CD25HighTreg细胞表达率与Foxp3 mRNA呈显著正相关(r=0.853，P=0.000;r=0.586，P=0.000)。6.HPV与Treg显著正相关(r=0.560，P＜0.05)。
　　结论:维吾尔族CD4+CD25+CD127lo/-Treg及相关因子TGF-β、IL-10及IFN-γ及Foxp3参与了维吾尔族宫颈癌Treg免疫逃避的过程。维吾尔族宫颈癌HPV与Treg密切相关。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

前言

第一部分 新疆乌鲁木齐市宫颈癌HPV分型流行病学研究

1．1 材料与方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 资料收集

1．1．3 实验室检测所用主要仪器和试剂

1．1．4 实验方法

1．1．5 整理数据和统计学分析

1．1．6 质量控制

1．2 结果

1．2．1 新疆乌鲁木齐市妇女生殖道感染HPV基因型分布

1．2．2 HPV感染的年龄分布

1．2．3 不同宫颈病变HPV检出率

1．2．4 不同职业人群HPV感染率

1．3 讨论

第二部分 新疆汉族、维吾尔族、哈萨克族生殖道HPV感染分型的研究

2．1 资料与方法

2．1．1 研究对象

2．1．2 资料收集同第一部分

2．1．3 实验室检测所需的主要仪器和试剂同第一部分

2．1．4 试验方法同第一部分

2．1．5 数据整理和统计分析

2．1．6 质量控制同第一部分

2．2 结果

2．2．1 维吾尔族高危型HPV感染危险因素的单因素分析

2．2．2 三个民族生殖道HPV感染的比较

2．2．3 三个民族妇女不同型别人乳头瘤病毒的检出率

2．2．4 不同宫颈病变HPV检出率

2．3 讨论

第三部分 维吾尔族宫颈癌HPV与Treg免疫逃避机理的研究

3．1 资料与方法

3．1．1 研究对象

3．1．2 标本的采集与处理

3．1．3 试剂

3．1．4 仪器

3．1．5 试验

3．1．6 统计学分析

3．2 结果

3．2．1 四组患者外周血CD4+CD25+CD127Lo／-Treg与TGF-β、IL-10及IFN-γ含量的及其相关性

3．2．2 宫颈癌患者手术前后外周血中CD4+CD25+CD127LO／-Treg与TGF-β、IL-10及IFN-γ含量的比较

3．2．3 四组患者外周血CD4+CD25highTreg含量比较

3．2．4 CD4+CD25+T细胞gP Foxp3 mRNA表达水平

3．2．5 宫颈癌患者和正常对照组CD4+CD25HighTreg细胞、Foxp3 mRNA进行相关性分析

3．2．6 不同宫颈病变HPV检出率

3．2．7 各组妇女外周血CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞亚群比较

3．2．8 各组患者外周血CD4+CD25+CD127-Treg含量的比较

3．2．9 HPV与外周血CD4+CD25+CD127-T reg、CD3+T、CD4+T细胞、CD8+T细胞的、以及CD4+／CD8+T细胞相关性

3．3 讨论

结论

参考文献

综述 HPV病毒检测在子宫颈癌普查中的临床意义

附录

攻读学位期间主要的研究成果

致谢