临床分离泛耐药菌的筛查及铜绿假单胞菌泛耐药机制研究

摘要

目的:(1)了解本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的临床分布、耐药特征及泛耐药现状。(2)探讨湖南地区临床分离泛耐药铜绿假单胞菌(PDR-PA)的主要耐药机制及分子流行病学特征。
　　方法:(1)连续收集湘雅医院2011年9月1日-2012年6月30日临床分离非重复对碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌以及湖南地区15家医院2011年1月1日-2011年12月31日多重耐药铜绿假单胞菌。VITEK-2全自动微生物分析系统或API对病原菌进行鉴定;K-B法检测抗菌药物的敏感性、筛查泛耐药菌株;药敏结果以软件WHONET5.6进行分析。(2)对37株PDR-PA采用改良Hodge试验初筛碳青霉烯酶、双纸片协同试验和双纸片增效试验筛查金属β-内酰胺酶。(3)PCR检测33种灭活酶基因（包括β-内酰胺酶基因、16SrRNA甲基化酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因等）、13种可移动性元件基因、3种外排泵基因以及外膜蛋白基因，并对扩增产物进行测序及BLAST分析。(4)琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验，观察抗生素的MIC变化。实时荧光定量PCR检测外排泵基因MexA以及外膜蛋白基因OprD2的相对表达量。(5)脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和聚类分析法进行菌株间同源性分析。
　　结果:(1)205株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要来源于呼吸道标本，占79.0％;科室分布以ICU(55.6％)为主。头孢哌酮/舒巴坦敏感率最高，为52.2％，对其他抗菌药物的耐药率达52.7％-100％，且监测到8株泛耐药鲍曼不动杆菌。(2)15家医院共分离到37株PDR-PA，改良Hodge实验阳性8株，阳性率为21.6％。金属β-内酰胺酶初筛阳性5株，阳性率为13.5％。(3)37株PDR-PA中，其灭活酶基因阳性有TEM、armA、rmtB、VIM、IMP和CARB，阳性率分别是100.0％、22.0％、5.0％、19.0％、22.0％和37.8％。可移动性元件tnpU、tnp513、tnpA/tn21、merA和IntⅠ等5种基因为阳性，阳性率分别为16.0％、81.0％、49.0％、100.0％和100.0％。所有阳性基因经BLAST分析证实，与Genbank中已知序列同源性均大于98.0％。(4)37株PDR-PA中，外排泵抑制试验阳性34株，阳性率为91.9％。对照组和实验组MexA基因的相对表达量分别为0.70±0.13以及1.95±0.48(P=0.018)，而OprD2基因的相对表达量分别为3.18±0.60以及0.94±0.08(P=0.002)。(5)37株PDR-PA可分为21个型，A型最多，共5株。A1亚型同时出现在湘雅医院和湘雅三医院，E1亚型分别出现在湖南省第二人民医院和湘雅三医院。
　　结论:(1)本院碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌呈严重的多重耐药性;(2)湖南地区已出现泛耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。(3)IMP、VIM、TEM、CARB、armA、rmtB等灭活酶以及外排泵MexAB-OprM的高表达和外膜蛋白OprD2的表达下降是导致本地区铜绿假单胞菌泛耐药的重要原因。(4)tnpU、tnp513、tnpA/tn21、merA和IntⅠ等可移动性元件在耐药性传播方面发挥了重要作用。(5)本地区PDR-PA呈散发形式存在，但在不同医院以及同一医院不同病区之间有克隆传播。

目录

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论文说明

摘要

英汉缩写词对照表

1 绪论

2 湘雅医院碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药特征

2．1 材料和方法

2．2 结果

2．3 讨论

3 铜绿假单胞菌泛耐药机制研究

3．1 灭活酶和可移动性元件检测

3．1．1 材料和方法

3．1．2 结果

3．1．3 讨论

3．2 外排泵和外膜蛋白

3．2．1 材料和方法

3．2．2 结果

3．2．3 讨论

4 湖南地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学研究

4．1 材料与方法

4．2 结果

4．3 讨论

5 结论

参考文献

综述 泛耐药铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

攻读硕士学位期间研究成果

致谢