大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

摘要

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养体系，诱导分化为神经元样细胞，筛选较好的体外诱导方法，为下一步内耳移植实验提供前期研究基础。
　　方法:1.BMSCs培养:主要采用全骨髓直接贴壁法培养BMSCs并传代，取P3代行流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD29，CD90及造血细胞表面抗原CD45的表达。2.取P4代BMSCs，由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后，分别加入:A组诱导剂:神经营养素3(NT-3)，维甲酸(RA);B组诱导剂:β-硫基乙醇(BME)。诱导1h，5h，24h，7d，14d，21d后，采用细胞免疫荧光方法鉴定，检测成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况，观察两组是否有染色阳性的神经元样细胞及比较阳性率的高低。
　　结果:1.全骨髓贴壁筛选法简便，所获得的细胞数量多，增殖分化快。2.流式细胞仪检测BMSCs表达CD90、CD29;不表达CD45，结合细胞形态分析，符合BMSCs的特征。3.细胞免疫荧光结果示NSE阳性表达,A组诱导分化为神经元样细胞的阳性率明显高于B组。
　　结论:1.全骨髓贴壁筛选法分离培养的BMSCs所获得的细胞数量多，增殖分化快，纯度高。2.采取分步诱导和联合诱导BMSCs，由bFGF预诱导24h后，换用NT-3+RA诱导分化为神经元样细胞NSE阳性率明显高于BME诱导，是一种比较好的诱导方案。

目录

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 BMSCs的分离培养及鉴定

2．1 实验材料与试剂

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要实验仪器设备

2．1．3 主要试剂

2．1．4．基本试剂的配制

2．1．5 实验器械

2．2 实验方法

2．2．1 技术路线

2．2．2 BMSCs的分离和培养

2．2．3 BMSCs表面标志物的鉴定

2．3 实验结果

2．3．1 不同培养时间BMSCs形态变化

2．3．2 BMSCs的流式细胞仪结果

2．4 讨论

2．4．1 鼠龄的选择

2．4．2 BMSCs的取材分离及纯化

2．4．3 BMSCs的培养

2．4．5 存在的问题

3 BMSCs的体外诱导分化

3．1 材料与方法

3．1．1 主要仪器设备

3．1．2 主要试剂及耗材

3．1．3 主要试剂及培养液的配置

3．2 实验方法

3．2．1 技术路线

3．2．2 BMSCs诱导分化成神经样细胞

3．2．3 细胞免疫荧光鉴定

3．2．4 BMSCs诱导分化成神经样细胞分化率的比较

3．3 结果

3．3．1 细胞形态学变化

3．3．2 细胞免疫荧光鉴定结果

3．3．3 BMSCs诱导后NSE阳性表达率

3．4 讨论

3．4．1 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导方法

3．4．2 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导分化机制

3．4．3 BMSCs诱导分化成神经元细胞样细胞的检测

3．4．4 BMSCs诱导分化成神经样细胞的应用前景

4 结论

参考文献

综述

攻读学位期间主要的研究成果

致谢