AP-1与NF-κB在足月妊娠临产后子宫下段平滑肌中相互作用的研究

摘要

目的:应用免疫共沉淀技术(co-immunoprecipitation，co-IP)与蛋白免疫印迹法（Western blotting，WB）相结合的方法初步证实核转录因子（Nuclear factor kappa B，NF-κB）与激活蛋白-1(Activatorprotein1，AP-1)在足月妊娠自然临产后人类子宫下段平滑肌中存在相互作用。
　　方法:实验分为足月妊娠自然临产组（以下简称临产组）、足月妊娠未临产组（以下简称未临产组）、未孕组，首先通过WB了解各组组织中核蛋白的提取情况，并初步了解NF-κB与AP-1在三组组织中的表达情况。再使用anti-NF-κB p65抗体对三组总蛋白进行co-IP实验，同时使用正常兔IgG对临产组总蛋白进行co-IP实验，目的是富集转录因子NF-κB及与其相互作用的转录因子。对co-IP下的蛋白复合物进行WB验证，鉴定anti-NF-κB p65抗体结合下来的总蛋白中是否存在转录因子AP-1;接下来，使用anti-c-Jun抗体对三组总蛋白进行co-IP实验，同时使用正常兔IgG对临产组总蛋白进行co-IP实验，目的是富集转录因子AP-1及与其相互作用的转录因子。对co-IP下的蛋白复合物进行WB验证，鉴定anti-c-Jun抗体结合下来的蛋白复合物中是否存在转录因子NF-κB。
　　结果:
　　1.WB结果显示核蛋白提取成功，NF-κB与AP-1在三组组织中都有表达。
　　2.IB验证anti-NF-κB P65抗体pull down下的蛋白复合物中在临产组、未临产组中36KD处有条带，在未孕组、临产组IgG中没有条带;在临产组、未临产组中两条带测得灰度值比值为:4∶1。
　　3.IB验证anti-c-Jun抗体pull down下的蛋白复合物中在临产组、未临产组中65KD处有条带，在未孕组、临产组IgG中没有条带;在临产组、未临产组中两条带测得灰度值比值为:2.6∶1。
　　结论:NF-κB与AP-1在足月妊娠临产前后的人类子宫下段平滑肌组织中存在特异性的相互作用，且在二者的相互作用临产后显著增强。

目录

声明

摘要

缩略语表

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验技术路线

2．2 标本来源与分组

2．3 主要试剂和仪器

2．3．1 主要仪器及设备

2．3．2 主要试剂及溶液配制

2．4 实验方法及步骤

2．4．1 WB检测各组组织总蛋白核蛋白的提取情况

2．4．2 免疫共沉淀

2．4．3 IB验证anti-NF-κB p65抗体沉降下的蛋白复合物中存在AP-1

2．4．4 IB验证anti-c-Jun抗体沉降下的蛋白复合物中存在NF-κB

3 结果

3．1 蛋白浓度的计算及核蛋白提取的鉴定

3．1．1 蛋白浓度的计算

3．1．2 核蛋白提取的鉴定

3．2 co-IP与IB的结果

4 讨论

4．1 AP-1与NF-κB在分娩发动中的相互作用

4．2 co-IP与IB相结合在蛋白质相互作用研究中的应用

5 结论

参考文献

综述 AP-1与NF-κB在分娩发动中相互作用的研究

攻读学位期间主要的研究成果

致谢