IgA肾病患者腭扁桃体凋亡相关蛋白表达及雷公藤甲素干预研究

摘要

IgA肾病是目前世界范围内最为常见的原发性肾小球疾病，是终末期肾病的重要原因之一，主要表现为以IgA为主，伴或不伴IgG、IgM在肾小球系膜区及毛细血管袢区的沉积。其发病机制与黏膜免疫的免疫应答异常有很重要联系，其中肾脏病学家对黏膜免疫相关淋巴组织腭扁桃体与IgA肾病发病机制之间关系进行了相关研究，大量证据支持腭扁桃体的异常免疫应答对IgA肾病患者的病情发展及缓解率有重要联系。Bcl-2家族蛋白作为凋亡相关蛋白通过线粒体途径对外周淋巴器官生发中心的凋亡有重要调节作用，Bcl-2表达过量甚至可导致滤泡性淋巴瘤形成。我们推测Bcl-2家族蛋白的表达异常可能导致IgA肾病患者腭扁桃体中生发中心增殖与凋亡平衡被打破，使得腭扁桃体黏膜免疫增强，成为IgA肾病的发病机制之一。同时雷公藤甲素可通过对淋巴细胞增殖与凋亡的调节发挥抑制免疫的作用，我们推测雷公藤甲素可能通过对Bcl-2家族蛋白的调节完成它的药理作用。
　　目的:研究IgA肾病腭扁桃体凋亡相关蛋白表达情况及不同雷公藤甲素干预对凋亡相关蛋白表达的调控。
　　方法:IgA肾病(IgA nephropathy，IgAN)组17例及慢性扁桃体炎(Chronic tonsilitis，CT)组13例被纳入研究。其中CT组包括4名睡眠呼吸暂停综合征患者，将两组病人腭扁桃体组织进行蜡块包埋及单个核细胞提取后，通过免疫组化及Western-Blot技术从组织学及蛋白表达水平测定Bcl-2家族蛋白（包括抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL及促凋亡蛋白Bax）表达。同时将IgAN患者的腭扁桃体单个核细胞提取出来，分为4组，经浓度为0 ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml的雷公藤甲素刺激处理72小时后，提取蛋白使用Western-Blot技术检测Bcl-2家族蛋白的表达。
　　结果:1、IgAN组的腭扁桃体抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达主要分布在生发中心明区，且表达水平高于CT组;促凋亡蛋白Bax表达主要分布在生发中心暗区及帽区，且表达水平低于CT组。Western-Blot检测两组病人腭扁桃体所提取凋亡相关蛋白进一步印证IgAN组腭扁桃体单个核细胞Bcl-2及Bcl-xL蛋白表达水平高于CT组，而Bax蛋白表达水平低于CT组。
　　2、经浓度依次升高的雷公藤甲素刺激后，IgAN患者腭扁桃体单个核细胞Bcl-2的表达随雷公藤甲素刺激浓度的增高而下降，当雷公藤甲素刺激浓度为20ng/ml、30ng/ml时，Bcl-2的表达水平与空白组相比差异存在统计学意义(P＜0.05); Bcl-xL的表达亦随雷公藤甲素刺激浓度的增高而下降，当雷公藤甲素刺激浓度为20ng/ml、30ng/ml时，Bcl-xL的表达水平与空白组相比差异存在统计学意义(P＜0.05);Bax的表达随雷公藤甲素刺激浓度的增高而增高，当雷公藤甲素刺激浓度为30ng/ml时，Bax的表达水平与空白组相比差异存在统计学意义(P＜0.05)。
　　3、经Pearson分析显示IgA肾病患者腭扁桃体单个核细胞Bcl-2、Bcl-xL的表达与雷公藤甲素刺激的浓度呈负相关(R=-0.729，P＜0.001;R=-0.48，P＜0.05)，Bax的表达与雷公藤甲素刺激的浓度呈正相关(R=0.726，P＜0.001)。
　　结论:IgAN组与CT组相比腭扁桃体生发中心增殖与凋亡的平衡被打破，存在凋亡减少的现象，这可能导致腭扁桃体黏膜免疫应答增强，特异性分泌IgA1浆细胞增多，最终IgA1在肾小球系膜区沉积增多。雷公藤在自身免疫性疾病中应用广泛，其活性成分雷公藤甲素可能通过对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Bax的调节实现对腭扁桃体单个核细胞凋亡与增殖调节。

目录

声明

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 患者资料

2．2 实验材料

2．3 实验方法

2．4 统计学方法

第三章 结果

3．1 IgAN组与CT组患者基本信息比较

3．2 IgAN组与CT组腭扁桃体组织Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白表达比较

3．3 IgAN组与CT组腭扁桃体体外培养单个核细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bax蛋白水平表达比较

3．4 不同浓度雷公藤甲素对IgAN患者腭扁桃体单个核细胞体外培养Bcl-2表达的影响

3．5 不同浓度的雷公藤甲素对IgAN患者腭扁桃体单个核细胞体外培养Bcl-xL表达的影响

3．6 不同浓度雷公藤甲素对IgAN患者腭扁桃体单个核细胞体外培养Bax表达的影响

第四章 讨论

4．1 IgA肾病患者腭扁桃体组织凋亡相关蛋白表达分析

4．2 雷公藤甲素对腭扁桃体单个核细胞凋亡的影响

第五章 结论

参考文献

综述 IgA肾病发病机制与腭扁桃体感染

攻读硕士学位期间研究成果

致谢