抑制神经酰胺合成对内质网应激通路所致糖尿病大鼠肝脏脂肪变性的影响

摘要

目的:研究旨在明确:抑制神经酰胺从头合成是否通过调节内质网应激通路中BIP/GRP78、CHOP、SREBP1蛋白的表达改善糖尿病大鼠肝脏脂肪变性。
　　方法:将60只雄性SD大鼠随机分成正常对照组（NC组）(n=15)、糖尿病模型组(n=45)。正常对照组喂养普通饲料，糖尿病模型组喂养高糖高脂饮食（66.5％普通饲料，20％蔗糖，10％炼猪油，2.5％胆固醇，1％胆酸盐）。4周后予糖尿病模型组大鼠腹腔注射小剂量STZ建立T2DM模型。造模成功后将糖尿病模型组随机分为糖尿病对照组(DMC组)及myriocin干预糖尿病组（MTD组）。MTD组予腹腔注射myriocin(0.3mg/Kg qod)，DMC组及NC组予腹腔注射等量生理盐水。NC组继续普通饮食，糖尿病组大鼠继续高糖高脂饮食。14周后将所有大鼠麻醉处死，留空腹全血检测血糖、胰岛素、糖化血红蛋白及血清神经酰胺、血脂、肝功能等指标。立即分离肝脏组织，于-80℃冰箱保存用于内质网应激相关蛋白BIP/GRP78、CHOP、SREBP1的Western-blot检测。
　　结果:1.与NC组相比，DMC组及MTD组血糖血脂、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数、血清神经酰胺明显升高(P＜0.05)，而MTD组较DMC组降低(P＜0.05)。2.与NC组相比，DMC组及MTD组转氨酶明显增高(P＜0.05)，肝脏湿重和肝脏指数增高(P＜0.05)，肝组织病理学有明显肝脂肪变性，而MTD组较DMC组转氨酶下降(P＜0.05)、肝脏湿重和肝脏指数降低(P＜0.05)，肝脂肪变性程度减轻。3.与NC组相比，DMC组BIP相对光密度值水平下降(P＜0.05)，MTD组BIP相对光密度值水平较DMC组增加(P＜0.05)。4.与NC组相比，DMC组和MTD组CHOP相对光密度值水平增加(P＜0.05)，MTD组相比DMC组有下降趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)。5.与NC组相比，DMC组SREBP1相对光密度值水平增加(P＜0.05)，MTD组较DMC组有下降趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:1.神经酰胺积聚可能通过下调BIP蛋白水平，上调CHOP、SREBP1蛋白水平参与NAFLD的发病。2.抑制神经酰胺合成可能通过调节内质网应激相关蛋白BIP、CHOP、SREBP1的表达改善NAFLD。

目录

声明

摘要

缩略词

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 仪器

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要试剂配方

2．1．4 实验动物

2．2 实验方法及步骤

2．2．1 T2DM大鼠模型的制作、动物干预和分组

2．2．2 Western blot分析BIP、CHOP、SREBP1蛋白表达

2．3 统计方法

第三章 实验结果

3．1 各组大鼠体重及肝脏湿重的变化

3．2 生化指标及肝脏病理的比较

3．3 抑制神经酰胺合成对糖尿病大鼠肝脏内质网应激通路BIP、CHOP、SREBP1蛋白表达的影响

第四章 讨论

4．1 神经酰胺积聚与抑制神经酰胺合成对糖尿病大鼠肝脂肪变性的影响及意义

4．2 神经酰胺积聚与抑制神经酰胺合成对内质网应激的影响

4．3 神经酰胺积聚与抑制神经酰胺合成对内质网应激通路BIP、CHOP、SREBP1蛋白表达的影响

第五章 结论

参考文献

综述 神经酰胺、内质网应激及与肝脂肪变性的关系

致谢