DNA损伤生物标志物8-羟基脱氧鸟苷检测新方法及其应用研究

摘要

DNA加合物是化学毒物经生物转化后的亲电活性产物与 DNA分子形成的共价结合物,它既是一种暴露标志物,又是一种效应标志物。8-羟基脱氧鸟苷是DNA损伤生物标志物中最有代表性的一种。建立8-羟基脱氧鸟苷的检测新方法具有重要的生物医学意义。
　　在本文第二章,用共振光散射技术建立了8-羟基脱氧鸟苷的检测新方法。研究表明:在pH9.0的R.B缓冲液中,吡啰红Y阳离子染料与8-羟基脱氧鸟苷阴离子形成离子缔合物,导致体系的共振光散射增强。在优化的实验条件下,体系的共振光散射强度随着8-羟基脱氧鸟苷的加入在339nm处急剧增强。共振光散射的增强(△IRLS)与8-羟基脱氧鸟苷浓度成线性关系,据此建立8-羟基脱氧鸟苷的共振光散射检测新方法,方法的线性范围为50.0~226.4ng/ml,检出限为15.2ng/ml,RSD=8.8％,平均加标回收率=94.6%。
　　在本文第三章,用能量转移技术建立了鱼精蛋白荧光猝灭法检测8-羟基脱氧鸟苷的新方法。在25℃、pH8.2的Tris-HCl缓冲溶液中,在0.50~7.1μg/ml范围内,8-羟基脱氧鸟苷浓度与鱼精蛋白的荧光猝灭强度成线性关系,r=0.9963,方法的检出限为0.18μg/ml,RSD=6.2%,平均加标回收率为104%(n=6)。
　　在本文第四章,应用荧光光谱法研究了8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白的作用机制。实验表明,8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白的相互结合作用为静态荧光猝灭过程;8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白的结合常数(KA)为3.10×104Lmol-1(t=25℃);根据Frster非辐射能量转移理论,确定供体-受体之间的距离(r)为3.47nm,能量转移效率(E)为0.24,鱼精蛋白与8-羟基脱氧鸟苷的作用力主要为静电引力。采用同步荧光光谱法研究了8-羟基脱氧鸟苷对鱼精蛋白构象的影响。

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第一章 前 言

1.生物标志物的定义

2 8-OHdG检测的医学意义

3 8-羟基脱氧鸟苷检测研究的发展趋势

4 共振光散射法和荧光猝灭法定量的原理

第二章 吡啰红Y共振光散射法测定8-羟基脱氧鸟苷

1 引言

2 材料与方法

3 结果与讨论

第三章 鱼精蛋白荧光猝灭法测定8-羟基脱氧鸟苷

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

第四章 8-羟基脱氧鸟苷与鱼精蛋白相互作用机制的研究

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

参考文献

综述

致谢