番茄红素对兔动脉粥样硬化形成和内皮细胞氧化损伤的影响

摘要

目前认为动脉粥样硬化疾病表现了一种高氧化应激状态,活性氧(reactive oxygen species,ROS)诱导的氧化应激在动脉粥样硬化疾病的发病中有重要作用。在动脉粥样硬化形成和发展的病理过程,活性氧不仅氧化修饰低密度脂蛋白,促进泡沫细胞形成,而且活性氧介导的脂质过氧化还可以破坏血管内皮细胞,导致其功能障碍,从而促进动脉粥样硬化发生发展。在冠心病的发病过程中从初发脂纹到斑块损伤发展,内皮功能受损具有十分重要的意义。血管内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化的早期病理改变,而脂质过氧化则可能为内皮功能受损的始动环节之一。因此,抗氧化剂通过阻止氧化应激损伤对动脉粥样硬化疾病的防治是有积极意义的。
　　大量的流行病学资料显示,番茄红素的摄入量与冠心病的危险性呈负相关,血浆低番茄红素有更高的急性心肌梗死和脑卒中的危险性。但其防治这些疾病的具体机制尚不清楚。番茄红素是很好的抗氧化剂,通过阻断或抑制氧化应激损伤可能是番茄红素抗动脉粥样硬化的形成的一条途径。我们试图通过动物实验和细胞实验研究探讨其抗动脉粥样硬化疾病的作用及机制。
　　第一部分番茄红素对兔动脉粥样硬化形成的影响
　　目的：观察番茄红素对高脂喂饲所致新西兰家兔动脉粥样硬化形成和脂质过氧化损伤的影响。
　　方法：采用高脂喂饲模型,将30只新西兰家兔随机分为3组:对照组、高脂模型组和番茄红素组,分别给予普通饲料和高脂饲料喂养,番茄红素组另加用番茄红素(每兔每天每公斤体重给予6％番茄红素粉剂60mg);于实验开始前1天和开始后第2、4、6、8周末取空腹血测定血清总胆固醇,甘油三酯,高密度脂蛋白胆固醇,血清超氧化物歧化酶活性,丙二醛含量,血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性。实验结束后,主动脉苏丹Ⅳ染色并拍下照片,观察脂质斑块面积。主动脉常规包埋切片,进行HE染色,显微镜下观察。
　　结果：与高脂模型组相比,番茄红素组血清甘油三酯含量减低;总胆固醇差异无显著性;血清超氧化物歧化酶活性明显增加;血清丙二醛的含量减少;一氧化氮合酶活性差异无显著性;一氧化氮含量增加;主动脉脂质斑块面积减少。
　　结论：番茄红素对兔主动脉脂质过氧化损伤具有较好的保护作用,能减轻高脂兔动脉粥样硬化病变形成。降甘油三酯,抗脂质过氧化损伤及保护血管内皮功能可能是番茄红素产生抗动脉粥样硬化作用的重要机制。
　　第二部分番茄红素对内皮细胞氧化损伤的保护作用
　　目的：观察番茄红素对活性氧介导的内皮细胞氧化损伤及凋亡的保护作用;观察番茄红素对 p53,caspase-3,ICAM-1mRNA表达的影响;探讨番茄红素作用的可能机制。
　　方法：用H2O2处理内皮细胞,观察在不同浓度H2O2作用下,以及同一浓度H2O2作用不同时间对内皮细胞的损伤,制造氧化损伤模型;并用番茄红素及H2O2共孵育内皮细胞,观察不同浓度番茄红素作用下对内皮细胞氧化损伤的保护作用,及观察p53,caspase-3,ICAM-1mRNA的表达。倒置显微镜观察细胞生长情况;MTT法测定细胞活力;Hoechst染色研究对细胞凋亡的影响;采用流式细胞术细胞凋亡的影响;测MDA看细胞的脂质过氧化水; RT-PCR观察mRNA的表达。
　　结果：显微镜观察可见番茄红素组内皮细胞受损收缩程度减轻;番茄红素能减少内皮细胞氧化损伤的产物MDA水平;提高内皮细胞的活性;Hoechst染色结果显示番茄红素组内皮细胞出现凋亡特征性改变的细胞核数目减少;流式细胞仪检测结果显示,番茄红素能降低氧化损伤内皮细胞的凋亡率; RT-PCR结果显示,番茄红素组内皮细胞p53,caspase-3,ICAM-1mRNA的表达明显低于H2O2损伤组;
　　结论：(1)番茄红素能减轻H2O2诱导的内皮细胞的氧化损伤;
　　(2)番茄红素能拮抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡;
　　(3)番茄红素能引起氧化损伤内皮细胞p53,caspase-3mRNA的表达下调;能引起ICAM-1mRNA的表达下调。

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前言

第一部分 番茄红素对兔动脉粥样硬化形成的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 番茄红素对内皮细胞氧化损伤的保护作用

1材料和方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

综述

硕士期间发表的论文

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