Ca螯合剂对无血清处理内皮细胞Ca浓度及S100A13、FGF1释放的影响

摘要

目的：探讨Ca2+螯合剂对无血清处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC12)Ca2+浓度([Ca2+]i)变化及S100A13、FGF1蛋白释放的影响，初步阐明Ca2+在S100A13、FGF1蛋白释放过程中的作用。 方法：应用激光共聚焦显微镜实时动态检测细胞内、外Ca2+螯合剂EGTA、BAPTA对无血清处理内皮细胞1h[Ca2+]i的影响。采用Western Blot检测无血清处理0h、0.5 h、1h、2h、3h细胞FGF1蛋白表达量及ELISA检测培养上清FGF1蛋白浓度。应用间接免疫荧光观察EGTA、BAPTA对无血清处理3h细胞S100A13、FGF1蛋白荧光分布的影响，Western Blot检测S100A13、FGF1蛋白表达量，ELISA检测培养上清S100A13、FGF1蛋白浓度。 结果：激光共聚焦Ca2+荧光显像结果显示正常培养的内皮细胞[Ca2+]i约0.1～0.3umol/l，在扫描期间较稳定；无血清处理细胞[Ca2+]i在15min内相对稳定，随后迅速上升，至17、18min时达1.5 umol/l再下降，于20min约为0.5umol/l，一直维持到50min，1h内细胞平均[Ca2+]i明显高于正常培养组(P<0.05)。EGTA、BAPTA能明显抑制无血清处理引起的细胞[Ca2+]i升高，平均[Ca2+]i与正常培养组差异无统计学意义(P>0.05)。 Western Blot结果显示无血清处理0h、0.5h细胞FGF1蛋白表达量无明显差异，1h、2h、3h组细胞FGF1蛋白表达量逐渐下降，与0h、0.5h组差异有统计学意义(P<0.05)。上述各组培养上清ELISA结果显示，0h、0.5h培养上清中FGF1浓度无明显差异，1h、2h、3h组培养上清中FGF1浓度依次升高，明显高于0h、0.5h组(P<0.05)。 间接免疫荧光结果显示无血清处理3h细胞内S100A13、FGF1蛋白荧光较正常培养组明显减弱；EGTA、BAPTA能拮抗无血清处理引起这两种蛋白荧光变弱。Western Blot结果显示无血清处理3h细胞S100A13、FGF1蛋白表达量较正常培养组明显低，额外添加EGTA、BAPTA时细胞这两种蛋白表达量与正常培养组无明显差异；上述各组细胞培养上清ELISA结果显示，无血清处理3h组培养上清中FGF1浓度较其它3组明显增高(P<0.01)。 结论：Ca2+螯合剂能有效拮抗无血清处理引起的HUVEC12细胞[Ca2+]i升高和S100A13、FGF1蛋白的释放。